Yüzdürme ile aktive edilen hücre sıralaması kullanılarak yüzdürme tabanlı T hücresi izolasyonu

Abstract

Kaynak: Snow, T., et al. Mikro Kabarcıklar Kullanılarak İnsan Periferik Kan Mononükleer Hücre Örneklerinden Flotasyona Dayalı T Hücresi İzolasyonu, Aktivasyonu ve Genişlemesi. J. Vis. Uzm. (2022)

Bu video, işlevselleştirilmiş yüzdürme ile aktive edilen hücre sıralama (BACS) teknolojisi kullanılarak periferik kan mononükleer hücrelerinden (PBMC'ler) T hücresi izolasyonunu göstermektedir. İzolasyon tekniği, hücrelerin biyotinile anti-CD3 antikorları ile işaretlenmesi ve antikora bağlı hücrelerin streptavidin'e bağlı mikro kabarcıklar kullanılarak ayrılması yoluyla CD3+ T hücrelerinin pozitif seçimini içerir.

Protocol

1. Pozitif seçim kullanılarak T hücrelerinin mikro kabarcıklarla izolasyonu

>NOT: Bu protokol, SAMB'leri kullanan küçük ölçekli bir CD3⁺ pozitif seçim yaklaşımını detaylandırır.

1. Ticari olarak elde edilen 3 x 10⁸ PBMC'yi, 1 milyon hücre (25 ng / M) başına 25 ng antikor konsantrasyonunda biyotinile anti-CD3 (OKT3) antikoru ile 2.5 mL ayırma tamponunda inkübe edin. Yukarı ve aşağı pipetleyerek nazikçe karıştırın ve oda sıcaklığında 10 dakika inkübe edin.
2. Üreticinin bildirdiği SAMB konsantrasyonuna göre 0,5 (SAMB miktarı):1 (hücre miktarı) oranında streptavidin mikro k....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Biyotin anti-insan CD3 (OKT3) Antikoru	Biyoefsane	317320
Lökopak	BiyoIVT	HUMANLMX100-0001129
Normal İnsan PBMC'leri	BiyoIVT	İNSANHİLHLP-0002562
Streptavidin Mikrokabarcık Kiti (Akadeum'un ayırma tamponunu içerir)	Akadeum	11110-000