Bağışıklık Sistemleri ve Bileşenleri

Bu videoda, monositlerin tam insan kanından immünmanyetik negatif ayırma ile izolasyonunu gösteriyoruz. İzole edilmiş monositler, daha fazla aşağı akış analizi için kullanılabilir.

Bu videoda, fare karaciğerinden Kupffer hücrelerinin veya karaciğer makrofajlarının izolasyonunu gösteriyoruz. Karaciğer bir sindirim çözeltisi ile perfüze edilir, ardından yoğunluk gradyan ayrımı yapılır. İzole edilmiş yapışık Kupffer hücreleri daha ileri analizler için kullanılabilir.

Bu videoda, mekanik bir ayrıştırma tekniği kullanarak fare dorsal kök ganglionundan (DRG) makrofajları izole etmek için enzim içermeyen bir protokol gösterilmektedir. Yeni toplanan DRG dokusunun homojenizasyonu üzerine, makrofajlar üzerindeki hücre yüzeyi reseptörlerine karşı antikorlar, hücreleri floresan olarak etiketlemek için kullanılır, ardından numunedeki makrofajların varlığını doğrulamak için akış sitometrisi yapılır.

Bu videoda, hasat edilmiş bir fare Peyer'in yamasından lenfositlerin izolasyonunu gösteriyoruz. İzole edilen lenfositler daha fazla analiz için kullanılabilir.

Bu videoda, monositler ve lenfositler içeren periferik kan mononükleer hücrelerinin, PBMC'lerin yoğunluk gradyanlı santrifüjleme ile bir insan buffy tabakasından izolasyonunu gösteriyoruz. İzole edilmiş PBMC'ler daha fazla analiz için kullanılabilir.

Bu videoda, B olmayan hücrelere özgü biyotinile antikorlar ve streptavidin konjuge manyetik mikro boncuklar kullanarak B hücrelerinin insan periferik kanından izolasyonunu gösteriyoruz.

Bu videoda, farelerin uzun kemiklerinden kemik iliği stromal hücrelerinin izolasyonunu ve kültürünü gösteriyoruz. İzole edilmiş yapışkan BMSC'ler daha fazla analiz için kullanılabilir.

Bu video, işlevselleştirilmiş yüzdürme ile aktive edilen hücre sıralama (BACS) teknolojisi kullanılarak periferik kan mononükleer hücrelerinden (PBMC'ler) T hücresi izolasyonunu göstermektedir. İzolasyon tekniği, hücrelerin biyotinile anti-CD3 antikorları ile işaretlenmesi ve antikora bağlı hücrelerin streptavidin'e bağlı mikro kabarcıklar kullanılarak ayrılması yoluyla CD3+ T hücrelerinin pozitif seçimini içerir.

Bu videoda, insan birincil T hücresi aktivasyonu için bir protokol açıklıyoruz. Naif T hücrelerinin anti-CD3 ve anti-CD28 antikorları ile kaplanmış manyetik boncuklarla inkübasyonu ve ardından interlökin-2 veya interlökin-15 tedavisi, naif T hücrelerinin aktivasyonuna ve bunların farklılaşmasına ve efektör veya hafıza T hücrelerine proliferasyonuna yol açar.

Bu videoda, marjinal hepatik lökositlerin fare karaciğerinden zorla perfüzyon ile izolasyonunu gösteriyoruz.

Bu video, seçici genişleme için insan karaciğer dokusundan doğal öldürücü hücreler veya NK hücreleri de dahil olmak üzere lenfositlerin izolasyonunu göstermektedir. Enzimatik ve mekanik sindirim, ardından yoğunluk gradyan ayrımı, NK hücreleri de dahil olmak üzere lenfosit izolasyonunu destekler. Toplanan lenfositler, NK hücrelerinin seçici genişlemesi için daha fazla kullanılabilir.

Bu videoda, doğal öldürücü (NK) hücrelerin bir besleyici hücre hattı kullanılarak doğrudan periferik kan mononükleer hücrelerinden (PBMC'ler) genişletilmesi için bir teknik gösterilmektedir. PBMC'ler, zara bağlı interlökin-21 (mIL-21) eksprese eden genetik olarak modifiye edilmiş lenfoblastoid besleyici hücrelerle birlikte kültürlenir ve kültür, interlökin-2 (IL-2) ve interlökin-15 (IL-15) sitokinleri ile desteklenir. Birlikte, bu ligand kokteyli, NK hücrelerinin yüksek saflıkta uzun süreli...

Bu video, testislerin bir bileşeni olan fare seminifer tübüllerinden Sertoli hücrelerinin izolasyon prosedürünü göstermektedir. Enzimatik sindirim ve tekrarlanan yıkamalar, Sertoli hücrelerinin çözeltiye salınmasını teşvik eder, bu da çoğalma ve büyüme için daha fazla kültürlenebilir.

Bu videoda, insan periferik kan mononükleer hücrelerinden (PBMC'ler) düşük konsantrasyonlu CD4+Vδ1+γδ T hücreleri popülasyonunun manyetik etiketlemeye dayalı izolasyonu için bir protokol gösterilmektedir. FITC konjuge anti-Vδ1 antikorları, manyetik anti-FITC mikro boncuklar ve anti-CD4 antikor kaplı süperparamanyetik boncukların bir kombinasyonu kullanılarak, CD4 + Vδ1 + T hücreleri PBMC popülasyonundan başarılı bir şekilde saflaştırılabilir.

Bu videoda, süreksiz sükroz gradyan santrifüjleme ile tümör taşıyan bir farenin kanından sitotoksik yüksek yoğunluklu nötrofillerin ve düşük yoğunluklu nötrofillerin izolasyonunu gösteriyoruz.

Bu video, bir fare modelinden dişeti bağışıklık hücresi ağının izolasyon prosedürünü göstermektedir. Enzimatik sindirim, diş eti dokusunu bağlı dişlerden ve kemikten serbest bırakır, bu da mekanik olarak daha fazla sindirilir ve diş etinden bağışıklık hücrelerini serbest bırakır. İzole edilen hücreler immünolojik deneyler için hazırdır.

Bu video, yetişkin farelerin periton boşluğundan olgun bağ dokusu tipi mast hücrelerini izole etmek için bir periton lavaj yöntemini göstermektedir. Periton boşluğundan primer immün hücrelerin bir karışımı izole edildikten sonra, uygun kültür koşulları altında mast hücrelerinin seçici proliferasyonu gerçekleştirilir.

Bu videoda, manyetik olarak aktive edilmiş hücre sıralaması kullanarak fare yavrusu beyinlerinden mikroglia da dahil olmak üzere CD11b hücrelerini izole etmek için bir protokol açıklıyoruz. Beyin dokuları, anti-CD11b antikor kaplı mikro boncuklarla inkübe edilen tek hücreli süspansiyonlar elde etmek için homojenize edilir, ardından CD11b+ hücre popülasyonunu saflaştırmak için manyetik sütun bazlı bir ayırma yapılır.

Bu video, bir fare modelinden kasık boşaltma lenf nodunun cerrahi izolasyon prosedürünü göstermektedir. Karın bölgesinin kesisi, cerrahi olarak alınan kasık lenf bezine erişim sağlar. Hasat edilen yarı saydam kasık lenf nodu immünolojik çalışmalar için kullanılabilir.

Bu videoda, farenin arka bacaklarından popliteal drenaj lenf düğümlerini toplamak için bir diseksiyon tekniği gösterilmektedir. Lenf düğümleri, doğuştan gelen ve adaptif bağışıklık arasında köprü kurmada kritik bir rol oynar ve korunmuş bir doku yapısı ve hücresel canlılık ile sağlam lenf düğümlerinin toplanması, lokal ve sistemik bağışıklık tepkilerinin incelenmesine yardımcı olabilir.

Bu video, birincil monositlerin makrofajlara hazırlanmasını göstermektedir. Birincil insan monositleri, granülosit-makrofaj koloni uyarıcı faktör (GM-CSF) kullanılarak M1 benzeri bir pro-inflamatuar fenotipe veya makrofaj koloni uyarıcı faktör (M-CSF) kullanılarak M2 benzeri bir anti-inflamatuar fenotipe izole edilebilir ve farklılaştırılabilir.

Bu videoda, insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerden (iPSC'ler) makrofajlar üretmek için in vitro bir yöntem açıklanmaktadır. iPSC'lerden makrofaj üretimi üç aşamada gerçekleşir: (i) mezodermal hücrelere farklılaşan üç boyutlu embriyoid cisimcikleri (EB'ler) oluşturmak için iPSC'lerin süspansiyon halinde toplanması, (ii) farklılaşmış EB'lerden makrofaj öncü hücrelerinin oluşumu ve (iii) makrofaj öncü hücrelerinin olgun, fonksiyonel makrofajlara farklılaşması.

Bu videoda, periferik kandan türetilmiş monositlerin M1 veya M2 makrofajlarına farklılaşmasını ve polarizasyonunu indüklemek için bir prosedür gösteriyoruz. Granülosit-makrofaj koloni uyarıcı faktör, lipopolisakkarit ve interferon-gama ile inkübasyon, pro-inflamatuar M1 makrofajları verirken, makrofaj koloni uyarıcı faktör ve interlökin-4 ile inkübasyon, anti-inflamatuar M2 makrofaj üretimini indükler.

Bu videoda, yaygın lenfoid progenitör hücrelerden (CLP'ler) plazmositoid dendritik hücreler (pDC'ler) oluşturmak için bir in vitro test gösterilmektedir. Saflaştırılmış CLP'lerin Fms benzeri tirozin kinaz-3 ligandı (FL) varlığında γ ışınlanmış besleyici hücrelerle birlikte kültürlenmesi üzerine, CLP'ler, varlığı akış sitometrisi kullanılarak doğrulanan yapışmayan pDC'lere farklılaşır.

Bu video, insan monositlerinden olgunlaşmamış, olgun ve tolerojenik dendritik hücrelerin veya DC'lerin oluşumunu göstermektedir. Monositlerin büyüme faktörleri ve sitokinlerle inkübasyonu, olgunlaşmamış DC'lerin üretimine yol açar. İmmün düzenleyici moleküllere yanıt olarak, olgunlaşmamış DC'ler tolerojenik ve olgun DC'lere farklılaşır.

Bu video, kemik iliği stromal hücrelerinin (BMSC'ler) adipositlere farklılaşmasını göstermektedir. İki aşamalı süreçte, spesifik büyüme faktörleri ve hormonların varlığında, farklılaşmamış BMSC'ler önce preadipositlere farklılaşır. Glikoz ve insülin ile tedaviyi içeren ikinci adım, çoklu lipid damlacıkları ile olgun adipositlerin oluşumuna yol açar.

Bu video, megakaryositlerin farklılaşması ve trombosit oluşumu için bir teknik göstermektedir. İnsan göbek kordonu kanından izole edilen hematopoietik kök progenitör hücreler, trombopoietin varlığında olgun megakaryositlere farklılaşır. Olgun megakaryositler, tek tek trombositlere yol açan proplateletler adı verilen sitoplazmik uzantılar üretir.

Bu video, üç boyutlu bir timik kültür sistemi kullanarak iPSC'den türetilmiş olgunlaşmamış T hücrelerinden fonksiyonel antijene özgü T hücreleri oluşturmak için bir protokolü gösterir. iPSC'den türetilmiş olgunlaşmamış T hücrelerinin endojen lenfosit tükenmiş fareler fetal timik loblarla birlikte kültürlenmesi, T hücrelerinin CD8αβ + MHC sınıf I + iPSC'den türetilmiş timik göçmenler (iTE'ler) oluşturmak üzere başarılı bir şekilde olgunlaşmasıyla sonuçlandı.

Bu videoda, murin tam kanından trombositlerin saflaştırılması ve ardından trombosit agonisti trombin ile aktivasyonu için bir protokol açıklanmaktadır. Akış sitometrisi ile analiz edildiğinde, saflaştırılmış dinlenme trombositleri, hücre yüzeyi markörü CD41'in ekspresyonuna dayalı olarak karakterize edilirken, saflaştırılmış aktive edilmiş trombositler, hem yüzey markörleri CD41 hem de CD62P'yi birlikte eksprese eder.

Bu videoda, nötrofil hücre dışı tuzakları (NET'ler) oluşturmak ve izole etmek için kullanılan bir in vitro teknik gösterilmektedir. Nötrofiller periferik kandan izole edilir ve NET üretmek için forbol miristat asetat (PMA) ile uyarılır. İnkübasyon sırasında, nötrofiller, granüler sitoplazmik proteinlerle karıştırılmış yoğunlaştırılmış kromatin içeren NET'leri serbest bırakmak için bir hücre ölümü (NETosis) sürecinden geçer.

Bu video, granülosit-makrofaj-koloni uyarıcı faktör veya GM-CSF üreten T yardımcı hücrelerinin (THGM) in vitro farklılaşmasını göstermektedir. İzole edilmiş naif T hücreleri, yüksek hücre içi GM-CSF üretimi ve diğer T yardımcı hücreye özgü sitokinlerin düşük ekspresyonu ile doğrulanan THGM'ye farklılaşma için uyarılır.

Bu video, mast hücrelerinin degranülasyon aktivitesini belirlemek için bir kolorimetrik testi göstermektedir. Mast hücreleri tarafından salınan enzim, substratı hidrolize eder ve renkli bir ürün üretir. Mast hücrelerinin degranülasyon aktivitesi, hücredeki toplam enzim içeriği ile normalize edilmiş hücre dışındaki enzimlerin salınım yüzdesi olarak ölçüldü.

Bu videoda, insan periferik kan B hücrelerinden saf B hücresi, bellek B hücresi ve plazmablast plazma hücresi alt popülasyonlarının akış sitometrisine dayalı sıralaması için bir protokol açıklıyoruz. Farklı B hücresi alt popülasyonları, B hücresi yüzeylerinde eksprese edilen CD19, CD27 ve CD38 reseptörlerine florofor bazlı antikor bağlanmasına ve ardından hücre sıralamasına dayalı olarak ayırt edilebilir.

Bu video, antikor salgılayan B hücrelerinin, ASC'lerin işlevini değerlendirmek için ELISpot testinin kullanımını göstermektedir. ASC'ler tarafından salgılanan antikorlar, enzim konjuge IgG veya IgM antikorları tarafından tespit edilen zara bağlı poliklonal antikor fragmanları ile etkileşime girer. Her bir oyukta üretilen renkli nokta, B hücrelerinin salgı aktivitesi ile ilişkili olan spesifik antikorun izotipinin varlığını gösterir.

Bu videoda, murin pankreas drenaj lenf düğümlerinden (PDLN'ler) tek hücreleri izole etmek için bir protokolü ve akış sitometrisi kullanarak tek hücreli popülasyondan düzenleyici T hücrelerinin (Treg'ler) karakterizasyonunu açıklıyoruz. Treg'ler, hücre yüzeyi belirteçleri CD4, CD25 ve Nrp1'in pozitif ekspresyonuna ve nükleer transkripsiyon faktörleri Foxp3 ve Helios'a dayanarak tanımlanır.

Kaynak: Bello-Gamboa, A. et al., İnsan İmmünolojik Sinapsını Görüntüleme.J. Vis. Uzm.(2019)
Bu video, bir floresan mikroskobu kullanılarak antijen sunan bir hücre ile yardımcı T lenfositleri arasındaki immünolojik sinaps oluşumunun in vitro çalışmasını göstermektedir. Yardımcı T lenfositlerinin T hücresi reseptörleri, antijen sunan hücrelerde bir antijen-MHC-II kompleksi ile etkileşime girer ve immünolojik sinapslar oluşturur, ardından floresan mikroskobu ile görüntülenen sinapsa doğru salgı...

Bu videoda, periferik kan mononükleer hücre kültüründen genişletilen sitokin kaynaklı öldürücü T hücrelerinin, CIK hücrelerinin oranını belirlemek için akış sitometrisine dayalı bir teknik gösteriyoruz.

Bu videoda, fare dalağında in situ interferon-gama (IFN-γ) sekresyonunu görselleştirmek için bir görüntüleme yöntemi gösterilmektedir. Bakteriyel enfeksiyon ve T hücreleri ve doğal öldürücü hücreler içinde IFN-γ birikiminin indüklenmesini takiben, dalak fareden alınır. Doku kesitleri elde edildikten sonra, hücrelerin içindeki IFN-γ'yi görselleştirmek için immün boyama yapılır.

Bu videoda, murin akciğer dokusundaki makrofaj hücre dışı tuzaklarının (MET'ler) immünoboyama ve konfokal mikroskopi tabanlı görselleştirilmesi için bir protokol açıklıyoruz. Dokuda yerleşik makrofajlar, makrofaj spesifik F4/80 yüzey glikoprotein markörünün ekspresyonu ile karakterize edilirken, MET'ler, MET belirteçleri matris metalloproteinaz 9, sitrüline histon H3 ve hücre dışı kromatin etiketlenerek görselleştirilir.

Bu video, bir murin modelinde deneysel otoimmün ensefalomiyeliti (EAE) indüklemek için bir antijen adjuvan emülsiyonu oluşturmak için etkili bir homojenizasyon tekniğini göstermektedir. Emülsiyon, inaktive edilmiş bir patojenik bakteri içeren sürekli bir yağ fazı ile çevrili su fazında bir otoantijen - miyelin oligodendrosit glikoproteini (MOG) içerir. Emülsiyon, uzun süreli bir bağışıklık tepkisi için sürekli bir antijen salınımı sağlar.

Bu video, konfokal mikroskopi kullanılarak transgenik farelerde γδ intraepitelyal lenfositlerin (IEL'ler) görselleştirilmesini göstermektedir. Cerrahi prosedür, bağırsak mukozasını ve villusunu ortaya çıkarmak için bir perforasyon hattı oluşturmayı ve uzunlamasına bir kesi yapmayı içerir. Transgenik fareler, raportör proteinleri yalnızca γδ IEL'lerde eksprese eder ve izlemelerine izin verir. İntravital görüntüleme, yeşil floresan işaretli γδ IEL'lerin bağırsak epitel hücresinin bazal zarı...

Bu video, aktinomisin-D ile tedaviyi takiben T lenfositlerden T lenfosit türevi mikropartiküllerin, LMP'lerin üretimini ve izolasyonunu göstermektedir.

Bu videoda, antijenik peptit yüklü MHC-Ig'ler ve anti-CD28 antikorları ile işlevselleştirilmiş manyetik nanopartikül bazlı yapay antijen sunan hücreler (aAPC'ler) kullanılarak nadir antijene özgü CD8+ T hücrelerinin izole edilmesi için bir protokol açıklanmaktadır. aAPC'lerin, antijenik peptit hedefli T hücresi reseptörlerini spesifik olarak eksprese eden CD8 + T hücreleri ile etkileşimi ve ardından in vitro genişlemeleri, bu CD8 + T hücresi popülasyonunun zenginleşmesi ve genişlemesi ile...

Bu video, spiral kanallara sahip bir mikroakışkan cihaz kullanarak nötrofillerin trakeal sekresyonlardan ayrılmasını göstermektedir. Cihaz, değişen kalınlıklar ve trapez şekilli kanallar kullanarak hücre boyutuna göre verimli bir ayırma sağlar. Kuvvetler arasındaki etkileşim, büyük nötrofillerin iç duvarın yakınında birikmesine neden olurken, eritrositler ve müsin agregatları dış duvarın yakınında kalarak etkili nötrofil ayrışmasını sağlar.

Bu videoda, non-invaziv pozitron emisyon tomografisi görüntülemesi için radyoaktif izotop konjuge monoklonal antikorlar kullanarak T yardımcı hücrelerinin hücre içi radyo-etiketlemesini gösteriyoruz.