Otoimmün ensefalomiyeliti indüklemek için bir antijen adjuvan emülsiyonunun hazırlanması

Özet

Kaynak: Bäckström, B. T. Deneysel otoimmün ensefalomiyeliti indüklemek için antijen/adjuvan emülsiyonları hazırlamak için hızlı, basit ve standartlaştırılmış bir homojenizasyon yöntemi. J. Vis. Uzm. (2022)

Bu video, bir murin modelinde deneysel otoimmün ensefalomiyeliti (EAE) indüklemek için bir antijen adjuvan emülsiyonu oluşturmak için etkili bir homojenizasyon tekniğini göstermektedir. Emülsiyon, inaktive edilmiş bir patojenik bakteri içeren sürekli bir yağ fazı ile çevrili su fazında bir otoantijen - miyelin oligodendrosit glikoproteini (MOG) içerir. Emülsiyon, uzun süreli bir bağışıklık tepkisi için sürekli bir antijen salınımı sağlar.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

NOT: Yöntemin şematik akışı Şekil 1'de açıklanmıştır.

1. Malzeme hazırlama

NOT: Tüm reaktifleri steril bir kapüşonda aseptik olarak hazırlayın ve belirtilen sıcaklıkta saklayın. Reaktifler, etkilerini kaybetmeden 2 yıla kadar saklanabilir.

1. 20 mg / mL Mycobacterium tuberculosis içeren CFA'yı aşağıda tarif edildiği gibi hazırlayın.
   1. 7 mL....

Sonuçlar

Şekil 1: Ticari bir emülsiyon kiti kullanılarak emülsiyon hazırlama işleminin şeması. Bu figür Topping ve ark.'dan izin alınarak yeniden kullanılmıştır.

Şekil 2: Farklı yöntemler kullanılarak üretilen emülsiyonların karakterizasyonu. (A) Üç farklı hazırlama yönteminden temsili görüntüler: standart homo.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
1 mL Enjeksiyon şırıngası	B. Braun	9166017V
1 mL Enjeksiyon şırıngası	Sigma-Aldrich	Z683531
7 ml kapaklı boş tüpler	Bertin-Enstrümanlar	P000944LYSK0A,0	7 mL tüp
50 mL steril santrifüj tüpü	Balıkçı Bilimsel	10788561	50 mL tüp
Dağıtıcı, hafif mineral yağ	Sigma-Aldrich	M8410	RT'de saklayın
Emülsiyon kiti	Bertin-Enstrümanlar	D34200.10 adet	Bir tüp, kapak ve piston içeren
Eksik Freund'un Adjuvanı	Sigma-Aldrich	F5506	+4 °C'de saklayın
Mikobakteri tüberkülozu, H37RA	Balıkçı Bilimsel	DF3114-33-8	+4 °C'de saklayın
Minilys-Kişisel Homojenizatör	Bertin-Enstrümanlar	P000673-MLYS0-A	Çalkalama homojenizatörü
MOG 35-55 Peptit	Yenilikçi	Yok
Montanide ISA 51 VG	Seppik	36362Z	FDA onaylı yağ adjuvanı
Pall Akrodisk Şırınga Filtreleri 0.2 μm	Balıkçı Bilimsel	17124381	Steril filtre
PBS, Ca2 +/Mg2 + içermez	Thermo Fisher Bilimsel	14190144	Pbs
Faz-Kontrast Mikroskobu	Olympus	BX40-B
Çelik Boncuk 3.2 mm	Balıkçı Bilimsel	NC0445832	Otoklav ve RT'de saklayın

Gazetesi Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Serisi