Gama Delta İntraepitelyal Lenfositlerin İntravital Görüntülenmesi

Özet

Kaynak: Jia, L., et al. Murin İnce Bağırsağında İntraepitelyal Lenfositlerin İntravital Görüntülemesi.J. Vis. Uzm.(2019)

Bu video, konfokal mikroskopi kullanılarak transgenik farelerde γδ intraepitelyal lenfositlerin (IEL'ler) görselleştirilmesini göstermektedir. Cerrahi prosedür, bağırsak mukozasını ve villusunu ortaya çıkarmak için bir perforasyon hattı oluşturmayı ve uzunlamasına bir kesi yapmayı içerir. Transgenik fareler, raportör proteinleri yalnızca γδ IEL'lerde eksprese eder ve izlemelerine izin verir. İntravital görüntüleme, yeşil floresan işaretli γδ IEL'lerin bağırsak epitel hücresinin bazal zarı boyunca dinamik hareketini yakalar.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Fare Hazırlığı

NOT: Hayvan hazırlama ve ameliyatı da dahil olmak üzere aşağıdaki prosedür 30-40 dakika sürecektir. Ameliyattan önce mikroskobu açın ve kapalı kuvözü mikroskop üzerinde 37 °C'ye ısıtın.

1. Bernard Malissen'den (INSERM, Paris, Fransa) elde edilen C57BL / 6 arka planında 8-10 haftalık TcrdEGFP fareleri üzerinde deneyler yapın. IACUC onaylı prosedüre göre, hayvanın ağırlığına bağlı olarak ketamin (120 mg / kg) v....

Sonuçlar

Şekil 1: Mezenterde bir delik oluşturmak için forseps kullanma.Dikişler için bir delik oluşturmak için zarın her iki tarafına forseps yerleştirin.

....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
35 mm çanak, No. 1.5 Lamel	MatTek	P35G-1.5-14-C
Alexa Fluor 633 Hidrazid	Canlandırıcı	A30634
BD PrecisionGlide Hipodermik iğneler - 27g	Thermo Fisher Bilimsel	14-826-48
BD Slip Tip Steril Şırınga - 1 ml	Thermo Fisher Bilimsel	14-823-434
BD Tüberkülin Şırınga	Thermo Fisher Bilimsel	14-829-9
Diseksiyon makası	Thermo Fisher Bilimsel	08-940
Elektrokoter	Thermo Fisher Bilimsel	50822501
Kapalı kuluçka odası	OKOLAB Laboratuvarı		mikroskop
Göz İğneleri, Boyut # 3; 1/2 Daire, Konik Nokta, 12 mm Akor Uzunluğu	Roboz Belediyesi	RS-7983-3
Hank'in Dengeli Tuz Çözeltisi	Sigma-Aldrich	55037C
Hoechst 33342	Canlandırıcı	H3570
Ters DMi8	Leica Belediyesi		mikroskop
Ketamin	Putney		Anestezi
Kimmendil	VWR (VWR)	21905-026
McPherson-Vannas makas 3" (7,5 cm) Uzun 5X0,15mm Düz Keskin	Roboz Belediyesi	RS-5600
Emilmeyen cerrahi iplik, İpek Makara, Siyah Örgülü	Balıkçı Bilimsel	NC0798934
Nugent Forseps 4.25" (11 cm) Uzun Açılı Pürüzsüz 1.2mm Uç	Roboz Belediyesi	RS-5228
Puralube Veteriner Merhem	Kır		Kayganlaştırıcı Göz Merhemi
63x 1.3 N.A. HC PLAN APO gliserol daldırma objektifli eğirme diski Yokogawa CSU-W1, iXon Life 888 EMCCD kamera, 405 nm diyot lazer, 488 nm DPSS lazer, 640 nm diyot lazer	Andor		Konfokal sistem
Ksilazin	Akorn Belediyesi		Anestezi

Belediyesi Serisi Serisi Gazetesi Serisi Serisi Serisi