Antijene Özgü CD8+ T Hücrelerinin Nanopartikül Bazlı Zenginleştirilmesi ve Genişletilmesi

Özet

Kaynak: Hickey, J. W., et al. Nadir Antijene Özgü T Hücrelerini Manyetik Nanopartiküllerle Zenginleştirin ve Genişletin. J. Vis. Uzm. (2018).

Bu videoda, antijenik peptit yüklü MHC-Ig'ler ve anti-CD28 antikorları ile işlevselleştirilmiş manyetik nanopartikül bazlı yapay antijen sunan hücreler (aAPC'ler) kullanılarak nadir antijene özgü CD8+ T hücrelerinin izole edilmesi için bir protokol açıklanmaktadır. aAPC'lerin, antijenik peptit hedefli T hücresi reseptörlerini spesifik olarak eksprese eden CD8 + T hücreleri ile etkileşimi ve ardından in vitro genişlemeleri, bu CD8 + T hücresi popülasyonunun zenginleşmesi ve genişlemesi ile sonuçlanır.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Antijene özgü CD8 + T Hücrelerini Hazırlanmış Nanopartikül Yapay Antijen Sunan Hücrelerle Zenginleştirin.

1. CD8 + T hücrelerini izole edin.
   1. İzoflura maruz bırakarak hayvanları ötenazi yapın ve ardından servikal çıkık yapın.
   2. Dalak ve lenf düğümlerini vahşi tip C57BL / 6j farelerden çıkarın ve bunları bir PBS çözeltisine yerleştirin. Organları yumuşatın ve hücreleri, sık sık PBS yıkamaları ile steril bir 70 μm hücre süzgecinden g....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
DimerX I: Rekombinant Çözünür Dimerik İnsan HLA-A2:Ig Füzyon Proteini	BD Biyolojik Bilimler	551263
DimerX I: Rekombinant Çözünür Dimerik Fare H-2D[b]:Ig	BD Biyolojik Bilimler	551323
DimerX I: Rekombinant Çözünür Dimerik Fare H-2K[b]:Ig Füzyon Proteini	BD Biyolojik Bilimler	550750
nanomag-D-spio, NH2, 100 nm nanopartiküller	Mikro Mod (Mikro Mod)	79-01-102
96 Kuyulu Yarım Alan Mikroplaka, siyah polistiren	Corning	3875
Super Mag NHS ile Aktif Boncuklar, 0,2 μm	Okyanus Nanoteknolojisi	SN0200
Anti-Biotin MicroBeads UltraPure	Milteny	130-105-637
EZ-Link NHS-Biyotin	ThermoFisher (Termo Balıkçı)	20217
C57BL/6J (B6 vahşi tip) fareler	Jackson Laboratuvarı	664
CD8A+ T Hücre İzolasyon Kiti, Fare	Miltenyi	130-104-075
MS Sütunları	Milteny	130-042-201
LS Sütunları	Milteny	130-042-401
Streptavidin-Phycoerythrin, SAvPE	Biyoefsane	405203
0,75 inçlik N52 disk mıknatısları	K&J Manyetikler	DX8C-N52
APC anti-fare CD8a Antikoru, klon 53-6.7	Biyoefsane	100711
LIVE/DEAD Sabitlenebilir Yeşil Ölü Hücre Leke Kiti, 488 nm uyarma için	ThermoFisher (Termo Balıkçı)	L-34969

adet Serisi Serisi Serisi