Primer Mast Hücrelerini Murin Periton Boşluğundan İzole Etme Tekniği

Özet

Kaynak: Tsvilovskyy, V., et al. Periton Kaynaklı Mast Hücrelerinin İzolasyonu ve Ca²⁺-görüntüleme ve Degranülasyon Testleri ile Fonksiyonel Karakterizasyonu. J. Vis. Uzm. (2018).

Bu video, yetişkin farelerin periton boşluğundan olgun bağ dokusu tipi mast hücrelerini izole etmek için bir periton lavaj yöntemini göstermektedir. Periton boşluğundan primer immün hücrelerin bir karışımı izole edildikten sonra, uygun kültür koşulları altında mast hücrelerinin seçici proliferasyonu gerçekleştirilir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

>1. İntraperitoneal lavaj ile PMC izolasyonu

1. Hücre izolasyonundan önce, Tablo 1'de listelenen malzemeleri hazırlayın.
2. PMC izolasyonu için 8 ila 14 haftalık erkek fareler kullanın. Bir fareyi CO₂ soluyarak ötenazi yapın ve refleks kaybıyla ölümü doğrulayın. Fareye %70 etanol püskürtün ve pimleri kullanarak (sırt tarafı aşağı) bir köpük blok üzerine sabitleyin. Künt kenar makası kullanarak farenin ventral derisini çıkarın. Periton bo....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
RPMI Orta	Termo Bilimsel	21875034
DPBS (DPBS)	Sigma-Aldrich	14190144
Fcs	Termo Bilimsel	R92157
IL-3 (İngilizce	Ar-Ge Sistemleri	403-ML
Scf	Termo Bilimsel	PMC2115
Penstrep Belediyesi	Termo Bilimsel	15140122
Kültür Mataraları (25 cm)	Greiner Bio-Bir	69160
15 mL Plastik Santrifüj Tüpleri	Sarstedt	6,25,54,502
Tezgah Üstü Santrifüj	Heraeus (Heraeus)	Megafüj 1.0R

Gazetesi Serisi ) Serisi Belediyesi