Ex Vivo Görüntüleme için Murin Popliteal Drenaj Lenf Nodlarının Çıkarılması İçin Bir Diseksiyon Yöntemi

Özet

Kaynak: Rezende, R. M., et al. Ex-Vivo Konfokal Mikroskopi Kullanarak Lenf Nodu Yapısının ve Hücresel Lokalizasyonun Görselleştirilmesi. J. Vis. Uzm. (2019)

Bu videoda, farenin arka bacaklarından popliteal drenaj lenf düğümlerini toplamak için bir diseksiyon tekniği gösterilmektedir. Lenf düğümleri, doğuştan gelen ve adaptif bağışıklık arasında köprü kurmada kritik bir rol oynar ve korunmuş bir doku yapısı ve hücresel canlılık ile sağlam lenf düğümlerinin toplanması, lokal ve sistemik bağışıklık tepkilerinin incelenmesine yardımcı olabilir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Popliteal drenaj lenf nodunu çıkarmak için cerrahi prosedür

1. CO kullanarak farelere ötenazi yapın₂ boğulma ve ardından servikal çıkık.
2. Fareleri akrilik aşamada yüzüstü pozisyonda yapışkan bantla hareketsiz hale getirin ve baldır ve dizinize pamuklu çubukla mineral yağ uygulayın (Şekil 1A-D).
3. Baldırda topuktan dize kadar orta hat insizyonu yapın (Şekil 1E, F).
4. Baldır kas sistemini deriden ayırın (Şekil 1F, G).
5. Popliteal fossayı açığa çıkarın (Şekil 1G). Popliteal lenf nodu, popliteal fossada yarı saydam bir küre olarak görünecektir.
6. Mikrocerrahi kavisli forseps kullanarak popliteal lenf nodunu çıkarın (Şekil 1G).
7. Alternatif olarak, fareyi sırtüstü pozisyonda çevirin ve baldırda topuktan dize kadar orta hat insizyonu yaparak ve ardından baldır kas sisteminin deriden ayrılmasını sağlayarak popliteal LN çıkarılması için pazı femoris ve semitendinosus arasındaki popliteal fossaya yaklaşın.
   not: Popliteal fossa, diz ekleminin arkasında yer alan sığ bir çöküntüdür. Popliteal lenf düğümünü görmek için dikkatlice açın.

Sonuçlar

Şekil 1: Popliteal lenf nodu hazırlığı. (A, B) FACS antikor ana karışımının pençe pedine deri altı enjeksiyonu. (C, D) Enjeksiyondan 3 saat sonra, fareyi ötenazi yapın, fareyi yapışkan bantlı (C) akrilik bir plaka üzerinde hareketsiz hale getirin ve insizyon çevresinde kürk birikmesini önlemek için karın derisine mineral yağ sürün (D). (E) Baldırda t...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Cellview kültür tabağı	Greiner-Biyografi	627861	35x10 mm cam tabanlı
Kimmendil	Kimtech Bilim Markası	7557	Boyut: 21 x 20 cm / kutu başına 100 yaprak
Mikrocerrahi kavisli forseps	WEP Cerrahi Aletler	ısmarlama	12,5 cm
Mikrocerrahi kavisli makas	WEP Cerrahi Aletler	ısmarlama	11,5 cm