Method Article

İmmün kompleksler kullanılarak dendritik hücre aktivasyonunun akış sitometrisi tabanlı analizi

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Santana-Magal, N., et al. Fare Monositinden Türetilmiş Dendritik Hücrelerin İzolasyon Protokolü ve Tümör İmmün Kompleksleri ile Sonraki İn Vitro Aktivasyonu.J. Vis. Uzm. (2018)

Bu videoda, immünoglobulin G (IgG) kaplı tümör hücreleri kullanılarak dendritik hücrelerin aktivasyonunu değerlendirmek için bir protokol gösterilmektedir. Dendritik hücreler, IgG kaplı tümör hücrelerini içselleştirir, tümör antijenlerini işler ve bunları, kostimülatör molekül CD86'nın birlikte ekspresyonu ile birlikte MHC-II molekülleri aracılığıyla yüzeyde sunar. Bu dendritik hücreler daha sonra aktivasyon durumlarını belirlemek için MHC-II ve CD86 hedefli immün boyama ve akış sitometrisi analizine tabi tutulur.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Numune toplama ile ilgili tüm prosedürler enstitünün IRB yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir.

1. Tümörle İlişkili Monosit Türetilmiş Dendritik Hücrelerin İzolasyonu

  1. Laminer akış başlığında, CO2 ötenazi uygulanmış farelerden tümörleri çıkarın ve tümörleri fetal sığır serumu (FBS) olmadan RPMI ortamına yerleştirin.
    not: Kürkteki olası kontaminasyonları en aza indirmek için farelerin tıraş edilmesi ve tümörleri çıkarmadan önce üzerlerine %70 etanol püskürtülmesi şiddetle tavsiye edilir. Tümörün 25 - 40mm2'yi geçmediğinden emin olun, çünkü daha büyük tümörl....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Ficoll-Paque PREMIUMGE-Sağlık17-5442-02
OptiPrep (Optik HazırlıkKök Hücre Teknolojileri7820
CD45 Mikro BoncuklarMiltenyi130-052-301
EasySep Monosit İzolasyon KitiKök Hücre Teknolojileri19861
Kollajenaz IVSigmaC9697-50MGHer lotu endotoksin için test edin
DNaz ISigmaDN25-10MG
HBSS (Türkçe)ThermoFisher (Termo Balıkçı)14025092
FBS (FBS)ThermoFisher (Termo Balıkçı)16140071Her lotu endotoksin için test edin
PE-CD11cBiyoefsane117307
APC-CD11bBiyoefsane101211
Parlak Menekşe 650 MHCIIBiyoefsane107641
AF48- CD86Biyoefsane105017
APC/CY7-LY-C6Biyoefsane108423
PE / CY7-CD15Biyoefsane135523
) adet Serisi Serisi

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Flow CytometryDendritic Cell ActivationImmune ComplexesMHC II ExpressionCD86 CostimulationCell DissociationAntibody StainingDead Cell StainingTumor Antigen ProcessingCell Surface Presentation

Related Articles