Fare Hipokampal Nöronlarını Kültürlemek İçin Bir Teknik

Özet

Kaynak: Yang, R., et al. Akson Başlangıç Segmentlerinin Montajını İncelemek İçin Birincil Kültürlenmiş Hipokampal Nöronların Kullanımı. J. Vis. Uzm. (2021)

Video, murin hipokampusundan nöronları kültürlemek için bir yöntemi göstermektedir. Başlangıçta, hipokampus, hücre dışı doku matrisini parçalamak için enzimatik sindirime uğrar. Daha sonra, sindirilen doku, tek tek nöronları izole etmek için mekanik olarak bozulur. Son olarak, bu nöronlar glial besleyici hücreler üzerinde kültürlenir.

Protokol

Numune toplama ile ilgili tüm prosedürler enstitünün IRB yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir.

>1. Glia hücre besleyici yemeklerin hazırlanması (kültür gününden 2 hafta önce)

1. Doğum sonrası 1 günlük bir fare beyninden korteksi inceleyin ve meninksleri soyun.
2. Temiz bir tezgah üzerinde temiz bir Petri kabında temiz bir makasla korteks dokusunu mümkün olduğunca ince doğrayın.
3. Doğranmış dokuyu 12 mL HBSS'ye aktarın ve 1.5 mL% 2.5 tripsin ve% 1 (ağırlıkça / hacim) DNaz ekleyin. 37 °C su banyosunda 15 dakika inkübe edin, her 5 dakikada bir sallayın. İyi sindirilmiş doku yapışkan hale gelir....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
10xHBSS	Thermo Fisher Bilimsel	14065-056
18 mm kapak camı (1.5D)	Balıkçı Bilimsel	12-545-84-1D
Fenol kırmızısı olmadan% 2,5 Tripsin	Thermo Fisher Bilimsel	14065-056
ANK3-E22/23f/f fareler	JAX (JAX)	Stok No: 029797
Poli-L-lizin hidroklorür	Sigma-Aldrich	26124-78-7
B27 serumsuz takviye edici gıda	Thermo Fisher Bilimsel	A3582801
DMEM (Ömer Çiçeğ	Thermo Fisher Bilimsel	11995073
GlutaMAX-I takviyesi	Thermo Fisher Bilimsel	A1286001
Lipofektamin 2000	Thermo Fisher Bilimsel	11668030
Earle tuzları ve L-glutamin içeren MEM	Thermo Fisher Bilimsel	11095-080
Nörobazal Orta	Thermo Fisher Bilimsel	21103-049
D-Glikoz	Sigma-Aldrich	G7021
Penisilin-streptomisin	Thermo Fisher Bilimsel	15140122

Gazetesi Gazetesi Serisi