$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. Üç Boyutlu (3B) Kültürde HNSC farklılaşması
>NOT: İnsan nöral kök hücrelerini (hNSC'ler) önceki bir yayında açıklanan etik olarak onaylanmış bir dokudan izole edin ve türetin. Lütfen bu prosedürü takip ederken etik ve kurumsal yönergeleri takip edin.
- 12 oyuklu Plaka Kullanarak 3D Kültür
- Prosedür boyunca aseptik bir teknik kullanın. Biyolojik bir güvenlik kabininde, sulama için su (WFIr) kullanılarak hazırlanan 2 ml/kuyu %70 etanol ekleyerek iskeleleri yeniden hidratlayın. % 70 etanolü her kuyunun duvarından aşağı dağıtarak iskelelere dokunmaktan kaçının.
- %70 etanolü dikkatlice aspire edin ve iskeleleri hemen 2 ml/kuyu Dulbecco'nun Modifiye Eagle Medium F12 (DMEM: F12) ile 1 dakika boyunca yıkayın. Yıkama işlemini iki kez tekrarlayın. Son yıkamadan sonra DMEM: F12'yi dikkatlice aspire edin.
- DMEM: F12'ye 2 ml / kuyu laminin (10 μg / ml) ekleyerek iskeleleri kaplayın. Plakayı 37 °C'de %5 CO2 nemlendirilmiş inkübatörde en az 2 saat inkübe edin. Plakayı ılık DMEM ile yıkayın: F12.
- Her iskeleyi 150 μl RMM+büyüme faktörü (GF) hacminde yaklaşık 500.000 hNSC ile tohumlayın.
- Hücrelerin iskelelere yerleşmesine izin vermek için plakayı 37 ° C'de% 5 CO2 nemlendirilmiş inkübatörde 3 saat inkübe edin.
- Her bir oyuğa 3,5 ml RMM ekleyin, hücreleri iskelelerden çıkarmamaya dikkat edin.
- Plakayı 7 gün boyunca inkübe edin; 1 gün sonra (ilk besleme) ve ilk beslemeden 2-3 gün sonra tekrar RMM ortamını (3.5 ml / kuyu) değiştirin.