Method Article

Mikroakışkan bir cihaz kullanarak nöromüsküler kavşakların oluşturulması

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Stoklund Dittlau, K. et al., Mikroakışkan Cihazlarda Fonksiyonel Nöromüsküler Kavşaklara Sahip İnsan Motor Ünitelerinin Üretimi.J. Vis. Uzm. (2021)

Video, mikroakışkan bir cihaz kullanılarak nöromüsküler kavşakların oluşumunu göstermektedir. Nöral öncü hücreler ve kas progenitör hücreleri, cihaz içindeki farklı kuyucuklara ekilir ve sırasıyla motor nöronlara ve miyotüplere olgunlaşmaya bırakılır. Bir hacim ve kimyasal gradyanın oluşturulması, aktif nöromüsküler kavşakların gelişmesine yol açar.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Numune toplama ile ilgili tüm prosedürler enstitünün IRB yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir.

Bu protokolde kullanılan tüm reaktifler ve ekipmanlar Malzeme Tablosunda listelenmiştir ve steril olarak kullanılmalıdır. Aksi belirtilmedikçe, ortam kullanılmadan önce oda sıcaklığına (RT) ısıtılmalıdır. Ko-kültür protokolüne genel bir bakış için lütfen Şekil 1'e bakın.

1. Motor nöron progenitörlerinin indüklenmiş pluripotent kök hücrelerden (iPSC'ler) farklılaşması

  1. 10. gün nöral progenitör (NPC) durumuna ulaşana kadar önceki bir çalışmadan uyarl....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Şekil 1: Mikroakışkan cihazlarda motor ünite protokolüne şematik genel bakış.Motor nöron farklılaşma protokolünün zaman çizelgesine göre 0. günden 28. güne kadar farklılaşma zaman çizelgesi ve ortak kültüre genel bakış. iPSC'lerden motor nöron farklılaşması 0. günde başlatılır ve sonraki 10 gün boyunca daha önce belirtildiği gibi gerçekleştirilir. 9. günde, cihaz sterilize edilir ve PLO-laminin ile ka.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
asetik asitKİMYA Laboratuvarı NVCL00.0116.1000Kaplama bileşeni. H226, H314 olarak adlandırılır. P280 Serisi
Agrin (rekombinant insan proteini)Ar-Ge sistemleri6624-AG-050Medya eki
Askorbik asitSigmaA4403Medya bileşeni
βIII-tübülin (Tübülin)Abcam Belediyesiab7751Antikor (1:500)
β-merkaptoetanolThermo Fisher Bilimsel31350010Medya bileşeni. H317'ye bakın. P280 olarak adlandırılır.
A vitamini içermeyen B-27Thermo Fisher Bilimsel12587-010Medya bileşeni
BDNF (beyin kaynaklı nörotrofik faktör)Peprotech teknolojisi450-02BBüyüme faktörü
bFGF (rekombinant insan temel fibroblast büyüme faktörü)Peprotech teknolojisi100-18BBüyüme faktörü
Dana derisinden elde edilen kollajenThermo Fisher Bilimsel17104019Kaplama bileşeni
CNTF (siliyer nörotrofik faktör)Peprotech teknolojisi450-13BBüyüme faktörü
DAPT (DALDIRMATocris Biyobilim2634Medya eki
DMEM/F12Thermo Fisher Bilimsel11330032Medya bileşeni
DMSO (Türkçe)SigmaD2650-100MLKriyoprezervasyon bileşeni. H315, H319, H335. P280 olarak adlandırılır.
Dulbecco'nun fosfat tamponlu tuzlu su (DPBS)Thermo Fisher Bilimsel14190250Kalsiyum yok, magnezyum yok
etanolVWR (VWR)20.821.296Sterilizasyon. H225 olarak adlandırılır. P280 Serisi
Fetal sığır serumuThermo Fisher Bilimsel10270106Medya bileşeni
Floresan Montaj OrtamıDako BelediyesiS3023 Serisiİmmünositokimya bileşeni
GDNF (glial hücre hattı kaynaklı nörotrofik faktör)Peprotech teknolojisi450-10BBüyüme faktörü
At serumuThermo Fisher Bilimsel16050122Medya bileşeni
IMDMThermo Fisher Bilimsel12440053Medya bileşeni
İnsülin transferrin selenyumThermo Fisher Bilimsel41400045Medya bileşeni
Nakavt serum değişimiThermo Fisher Bilimsel10828-028Kriyoprezervasyon bileşeni
Engelbreth-Holm-Swarm murin sarkomu bazal membranından lamininSigmaL2020-1MGKaplama bileşeni ve medya takviyesi
L-glutaminThermo Fisher Bilimsel25030-024Medya bileşeni
N-2 takviyesiThermo Fisher Bilimsel17502-048Medya bileşeni
Nörobazal ortamThermo Fisher Bilimsel21103049Kaplama ve medya bileşeni
Esansiyel olmayan amino asitlerThermo Fisher Bilimsel11140050Medya bileşeni
Parafilm MSigmaP7793-1EAEkipman depolama
Penisilin / Streptomisin (5000 U / mL)Thermo Fisher Bilimsel15070063Medya bileşeni
Petri kabı (3 cm)nunc (Nunc)153066Çap: 3 cm
Petri kabı (10 cm)Sarstedt833.902Çap: 10 cm
Plaka (6 kuyulu)Cellstar Greiner biyo-bir657160Kültür plakası
Poli-L-ornitin (PLO)SigmaP3655-100MGKaplama bileşeni
Retinoik asitSigmaR2625 SerisiMedya eki. H302, H315, H360FD, H410. P280 olarak adlandırılır.
Revita hücre takviyesiThermo Fisher BilimselA2644501ROCK inhibitörü çözeltisi
Düzleştirilmiş agonistÜrün Kırlangıç566660Medya eki
Sodyum piruvatYaşam Teknolojileri11360-070Medya bileşeni
T75 şişesiSigmaCLS3276Kültür plakası
TrypLE ekspresThermo Fisher Bilimsel12605010MAB ayrışma çözümü
Tubosirarin hidroklorür pentahidratSigmaT2379-100GAsetilkolin reseptör blokeri. H301 olarak adlandırılır. P280 olarak adlandırılır.
XonaChips önceden monte edilmiş mikroakışkan cihazXona Mikroakışkanlarİkinci El XC150Mikro oluk uzunluğu: 150 μm
Serisi Serisi Serisi Serisi ) Serisi Serisi Sertifikası Serisi Serisi Belediyesi adet Serisi

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Neuromuscular JunctionsMicrofluidic DeviceNeural Progenitor CellsMuscle Progenitor CellsMotor NeuronsMyotubesMicrogroovesCell SeedingGrowth MediumDifferentiation Medium

Related Articles