İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerin Mikro Elektrot Dizileri Üzerinde Nöronlara Farklılaşması

Özet

Kaynak: Frega, M., et al., Mikro-elektrot Dizilerinde Ağ Aktivitesini Ölçmek için İndüklenmiş Pluripotent Kök Hücrelerin Hızlı Nöronal Farklılaşması. J. Vis. Uzm . (2017)

Video, insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerden (hiPSC'ler) uyarıcı kortikal nöronlar üretmek için bir yöntem göstermektedir. Doksisiklin indüksiyonu üzerine, hiPSC'ler nöral spesifik bir transkripsiyon faktörü olan nörogenin-2'yi aşırı eksprese eder. Bu süreç, belirli ortamlar kullanarak ve astrositlerle birlikte kültürlenerek, hiPSC'lerin sinaptik bağlantıları olan nöronlara farklılaşmasını kolaylaştırır.

Protokol

Numune toplama ile ilgili tüm prosedürler enstitünün IRB yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir.

1. rtTA/Ngn2-pozitif hiPSC'lerin 6 oyuklu MEA'lar ve Cam Lameller Üzerindeki Nöronlara Farklılaşması

>NOT: Bu protokolde, rtTA/Ngn2-pozitif hiPSC'lerin iki farklı substrat üzerinde ayırt edilmesi için ayrıntılar sağlanmıştır, yani 6 oyuklu MEA'lar (kuyu başına 9 kayıt ve 1 referans gömülü mikroelektrotlu 6 bağımsız kuyudan oluşan cihazlar) ve 24 oyuklu bir plakanın kuyucuklarındaki cam lameller. Bununla birlikte, protokoller, belirtil....

Sonuçlar

Şekil 1: hiPSC'nin Nöronlara Farklılaşması. A. HiPSC'lerin lameller üzerindeki nöronlara farklılaşmasının üç zaman noktası. B. HiPSC'lerin MEA'lar üzerine kaplanması. C. T75 şişesinde% 100 birleşimde astrositler (hücrelerin mozaiklenmiş bir tek tabaka oluşturduğuna dikkat edin). Ölçek çubukları: 150 μm.

....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
B-27 takviyesi	Gibco (Gibco)	0080085SA
Ca2 +/Mg2 + içermeyen HBSS	Gibco (Gibco)	14175-095
% 0,05 Tripsin-EDTA	Gibco (Gibco)	25300-054
% 2,5 Tripsin	Gibco (Gibco)	15090-046
Yüksek glikozlu DMEM	Gibco (Gibco)	11965-092
FBS (FBS)	Sigma-Aldrich	F2442-500ML
Penisilin / Streptomisin	Sigma-Aldrich	P4333 Serisi
70 μm hücre süzgeci	BD Şahin	352350
DPBS (DPBS)	Gibco (Gibco)	14190-094
Bodrum membran matrisi	Gibco (Gibco)	A1413201
DMEM/F12	Gibco (Gibco)	11320-074
Hücre ayırma çözümü	Sigma-Aldrich	A6964
E8 orta	Gibco (Gibco)	A1517001
KAYA inhibitörü	Gibco (Gibco)	A2644501	Alternatif olarak, tiazovivin gibi ROCK inhibitörleri kullanılabilir.
6 kuyulu MEA'lar	Çok Kanallı Sistemler	60-6kuyuMEA200/30iR-Ti-tcr
Cam lameller	VWR (VWR)	631-0899
Poli-L-ornitin	Sigma-Aldrich	P3655-10MG
Laminin	Sigma-Aldrich	L2020-1MG
Doksisiklin	Sigma-Aldrich	D9891-5G
N-2 takviyesi	Gibco (Gibco)	17502-048
Esansiyel olmayan amino asitler	Sigma-Aldrich	M7145
NT-3, insan rekombinant	Promosyon	C66425
BDNF, insan rekombinantı	Promosyon	C66212
Tripsin-EDTA	Gibco (Gibco)	25300-054
Nörobazal ortam	Gibco (Gibco)	21103-049
Sitozin β-D-arabinofuranosid	Sigma-Aldrich	C1768-100MG

Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Gazetesi Serisi Serisi Serisi Gazetesi Serisi