Zebra Balığı Embriyolarından Primer Retinal Ganglion Hücre Kültürlerinin Üretilmesi

Özet

Kaynak: Terzi, A., et al., ROS Nöronal Gelişim Sırasında Canlı Hücre Görüntüleme. J. Vis. Uzm. (2021)

Video, zebra balığı embriyolarından primer retinal ganglion hücrelerinin kültürlenmesi için bir yöntemi göstermektedir. Erken evre embriyolar, gözleri izole etmek için diseksiyona tabi tutulur ve daha sonra mekanik olarak retinal ganglion hücrelerinin bir süspansiyonuna ayrışır. Bu hücre süspansiyonu, akson gelişimini kolaylaştırmak için yapışkan proteinlerle kaplanmış lameller üzerinde kültürlenir.

Protokol

1. Çözeltilerin hazırlanması

1. E2 ortamı (1x)
   1. Tablo 1'de gösterilen tüm bileşenleri birleştirerek 100x E2A (500 mL), 500x E2B (100 mL) ve 500x E2C (100 mL) çözeltileri hazırlayın. Otoklav E2A, E2B ve E2C çözümleri. 4 °C'de saklayın.
   2. 1x E2 ortamı için: 5 mL 100x E2A, 1 mL 500x E2B ve 1 mL 500x E2C'yi birleştirin. Steril su ile hacmi 500 mL'ye getirin. PH'ı 7.0-7.5'e ayarlayın.
   3. 1x E2 ortamının 50 mL'lik alikotlarını hazırlayın ve uzun süreli saklama için -20 °C'de saklayın. Bununla birlikte, çözülme üzerine yağışlar meydana gelebilir. Stok çözeltisini kullanmadan önce çökeltinin tamamen çözüld....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
35 mm kültür kabı	Sarstedt	83-3900
Kalsiyum Klorür Dihidrat	Balıkçı Bilimsel	C79-500
Kapak camı	Corning	2850-22
Tek Kullanımlık Petri Kapları (100 x 15 mm)	VWR (VWR)	25384-094
Fetal Sığır Serumu	ThermoFisher Bilimsel	26140087
glikoz	Sigma Aldich ·	G7528
HEPES ÜNİVERSİTESİ	Sigma Aldich ·	H4034
Laminin	ThermoFisher Bilimsel	23017-015
Leibovitz'in fenol kırmızısı içermeyen L-15 Medium'u	Gibco/Fisher Bilimsel	21-083-027
Pbs	Hyclone / Fisher Bilimsel	SH3025601
Penisilin / streptomisin	ThermoFisher Bilimsel	15140122
Poli-D-Lizin (PDL)	Sigma Aldich ·	P7280 Serisi
Sodyum Pirüvat	Sigma Aldich ·	P5280 Serisi
Steritop 0,22 μm filtre	Kırlangıç	S2GPT05RE

Belediyesi arası Serisi Serisi Serisi