Kan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerden Nöronal Hücre Üretimi

Özet

Kaynak: Becker-Kojić, Z. A., et al. GM içermeyen kan kaynaklı nöronal hücre nesli. J. Vis. Uzm. (2021).

Bu videoda, kandan türetilmiş pluripotent kök hücrelerden (BD-PSC'ler) nöronal hücreler üretme tekniği gösterilmektedir. BD-PSC'ler, kan progenitör hücrelerinin yeniden programlanması yoluyla elde edilir. Farklılaşmamış BD-PSC'ler, bir nöral indüksiyon ortamı ve bir nöral farklılaşma ortamı kullanılarak hücre kültürü substratı kaplı lameller üzerinde kültürlenir ve nöronal fenotipe sahip hücrelere farklılaşmayı tetikler.

Protokol

Deneyler yapılırken etik onaylar alındı.

1. İnsan periferik kan mononükleer hücrelerinin (PBMNC'ler) izolasyonu

1. Tüm bağışçıların kan almadan önce kurumsal yönergelere uygun olarak bilgilendirilmiş onam imzaladığından emin olun.
2. Standart protokole göre eğitimli tıbbi personel tarafından sağlıklı donörlerden 30 mL kan alın.
3. PBMNC'leri yoğunluk gradyan ortamına göre izole edin. Fosfat tamponlu salin (PBS) ile seyreltilmiş 25 mL 1: 1 kan içeren 10 mL ortam kullanın ve 30 dakika boyunca 300 x g'da santrifüjleyin.
4. Pipetleme ile plazma ve yoğunluk gradyanlı ortam arasındaki ara fa....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Albümin Fraksiyonu V	Roth	T8444.4
AO/PI Hücre Canlılık kiti	Biyozym	872045	Biozym durduruldu. Logos Biosystems tarafından üretilen ürün.
Askorbik asit 2-fosfat sequimagnes	Sigma Aldrich	A8960-5G
B27 Serum içermez 50x	Balıkçı Bilimsel (Gibco)	11530536
Temel FGF çözümü	Balıkçı Bilimsel (Gibco)	10647225
Biyocoll	Merck Kırlangıç	L6115-MÖ	yoğunluk gradyan ortamı
BSA Frac V %7,5	Gibco (Gibco)	15260037
CD45 Mikro Boncuklar	Miltenyi	130-045-801	nano boyutlu manyetik boncuklar
Hücre sayma slaytları Luna	Biyozym	872010	Biozym durduruldu. Logos Biosystems tarafından üretilen ürün.
D-MEM/F12	Merck Kırlangıç	FG4815-MÖ
FBS (FBS)	Merck Kırlangıç	S0115/1030B	Üretilmiyor. Altında mevcut: TMS-013-B
GDNF rekombinant insan	Balıkçı Bilimsel (Gibco)	10679963
GlutaMax 100x	Gibco (Gibco)	35050038	L-glutamin
Heparin sodyum hücresi	Sigma-Aldrich	H3149-50KU
İnsan BDNF	Balıkçı Bilimsel (Gibco)	11588836
Iscove (IMDM)	Biyokrom	FG0465
Laminin fare	Balıkçı Bilimsel (Gibco)	10267092
Luna FL Otomatik Hücre Sayacı	Biyozym	872040	Biozym durduruldu. Logos Biosystems tarafından üretilen ürün.
MACS Tamponu	Miltenyi	130-091-221
MEM NEAA 100x	Gibco (Gibco)	11140035
MiniMACS trennsäulen	Miltenyi	130-042-201
Multiplatte Nunclon 4 kuyusu	Balıkçı Bilimsel	10507591
N2 Takviyesi 100x	Balıkçı Bilimsel (Gibco)	11520536
Nörobazal Orta	Gibco (Gibco)	10888022
PBS steril	Roth	9143.2
Poli-L-ornitin	Sigma-Aldrich	P4957-50ML

(İngilizce) · (İngilizce) Gazetesi Serisi (İngilizce) Gazetesi Serisi