Sıçan Beyninden Elde Edilen Glial Hücrelerin Üç Boyutlu Bir Kültürünün Oluşturulması

Özet

Kaynak: Koss, K. M, et al. Nöroinflamasyonun İn Vitro Modellemesi için Primer Glial Hücrelerin Geliştirilmiş 3D Hidrojel Kültürleri. J. Vis. Uzm. (2017).

Bu video, glial hücrelerin üç boyutlu bir kültürünü oluşturmak için bir tekniği göstermektedir. Sıçan beyninden türetilen glial hücreler, hücre dışı matris bileşenleri içeren fotokrosçapraz bağlanabilir bir polimer matris içinde kapsüllenir. Bir büyüme ortamında inkübe edildikten sonra, glial hücreler, üç boyutlu bir kültür oluşturmak için destekleyici matris içinde çoğalır.

Protokol

1. gün Sprague Dawley sıçan yavrularından beyin dokusu ekstraksiyonu için protokol, dekapitasyon ile ötenazi yapıldı, Alberta Üniversitesi'ndeki Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylandı.

1. Mikroglia ve Astrosit İzolasyonları

>NOT: İzolasyon ve hücre kültürü için tüm ortamlar bir su banyosunda 37 °C'ye önceden ısıtılır. Hank'in dengeli tuz çözeltisi (HBSS)% 1 penisilin-streptomisin (PS) içerir. Dulbecco'nun Ham'ın F12 besin karışımı (DMEM/F12) ile modifiye edilmiş tüm Eagle's media'sı %10 fetal sığır serumu (FBS) ve %1 penisilin-streptomisin (PS) ile desteklenir. Sadec....

Sonuçlar

Şekil 1: 1. gün Sprague Dawley sıçan yavrusu beyninin diseksiyonu.Tüm beyin (A), korteks ve beyincik diseksiyonu (B), meninksli tek bir korteks (C), meninkslerin forseps ile soyulması (D) ve meninkssiz korteks (E) görüntüleri.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
1. HAMA sentezi ve fotopolimerizasyonu için malzemeler
Hyaluronik asit (HA)	Sigma-Aldrich	53747-10G	Streptococcus eşdeğeri, MW: 1.5 - 1.8 X 10^6
Metakrilik anhidrit (MA)	Sigma-Aldrich	275585-100ML
Sodyum hidroksit (NaOH)	Sigma-Aldrich	221465-25G
Etanol (EtOH)	Ticari Alkoller A.Ş.		Susuz
Fosfat tamponlu salin (pH 7.4) tabletleri	Balıkçı Bilimsel	18912014
Trietanolamin (ÇAY)	Sigma-Aldrich	90279-100ML
1-Vinil-2pirolidinon (NVP)	Sigma-Aldrich	V3409-5G
EosinY (EY)	Sigma-Aldrich	E6003-25G
Polidimetilsiloksan (PDMS) Sylgard 184 Silikon Elastomer Kiti	Dow Corning
3- (Trimetoksisilil) propil metakrilat	Sigma-Aldrich	440159-100ML
Beher (100 mL)	Corning	1000-100
Beher (500 mL)	Corning	1000-600
pH kağıdı (Labstick)	Sigma-Aldrich	9580
2. Glial hücre izolasyonu ve hücre kültürü için malzemeler
P1-2 Sprague Dawley sıçan yavruları	Charles Nehri	CD Sprague Dawley sıçan suş kodu 001
Disektör makası - ince bıçaklar (küçük)	Güzel Bilim Araçları	14081-09
Cerrahi makas - Toughcut (büyük)	Güzel Bilim Araçları	14130-17
İnce forseps (Dumont #5)	Güzel Bilim Araçları	11521-10
Kavisli ince forseps (Dumont #7)	Güzel Bilim Araçları	11271-30
Hank'in dengeli tuz çözeltisi (HBSS)	Gibco (Gibco)	14170-112
Dulbecco'nun modifiye edilmiş Eagle'ın ortamı ve Jambon'un besin karışımı F-12 (DMEM/F12)	Gibco (Gibco)	11320-033
Penisilin-streptomisin (PS)	Gibco (Gibco)	15140-122
Fetal sığır serumu (FBS)	Gibco (Gibco)	12483-020
% 0.25 Tripsin etilendiamintetraasetik asit (EDTA)	Gibco (Gibco)	25200-072
Poli-L-lizin (PLL)	Sigma-Aldrich	P-6282
50 mL konik santrifüj tüpü	Balıkçı Bilimsel	05-539-13
15 mL konik santrifüj tüpü	Balıkçı Bilimsel	05-539-5
12 kuyulu Doku kültürü ile muamele edilmiş plaklar (Cellstar)	Greiner Bio-Bir	665 108
10 mL serolojik pipet	Balıkçı Bilimsel	13-676-10F
25 mL serolojik pipet	Balıkçı Bilimsel	12-676-10K
Petri kabı (60 mm X 15 mm)	Balıkçı Bilimsel	FB0875713A
Petri kabı (100 mm X 15 mm)	Balıkçı Bilimsel	FB0875712
Mikroskop Lameli (18 mm)	Balıkçı Bilimsel	12-545-100 18CIR

Gazetesi Gazetesi Gazetesi Gazetesi Gazetesi Gazetesi Gazetesi arası arası Gazetesi numaralı telefondan temin edilmiştir. Gazetesi Serisi