Sinaps Oluşumunu İndüklemek için Astrositlerin ve Nöronların 3D Ko-Kültür Kürelerinin Oluşturulması

Özet

Kaynak: Cvetkovic, C., et al. İnsan Pluripotent Kök Hücrelerinden Astrositlerin ve Nöronların 3D Kokültürleri ile Sinaptik Mikro Devre Modellemesi. J. Vis. Uzm. (2018).

Bu video, 3B küreler oluşturmak için astrositleri ve nöronları birlikte kültürlemek için bir prosedürü göstermektedir. Bu 3B küreler, sinaps oluşumunu ve sinir ağı entegrasyonunu incelemek için ayrı bir platform sağlar, böylece gelişimsel sinirbilim, nörodejeneratif hastalıklar ve nörofarmakolojik müdahalelerde araştırma için potansiyel bir model görevi görür.

Protokol

1. 3D Küre Kokültürlerinin Hazırlanması ve Bakımı

1. hAstros'u süspansiyondaki 3B agregalardan ayırın.​
   1. Karanlık merkezler ortaya çıktığında insan astrosit (hAstro) agregalarını ayırma solüsyonu ile nazikçe ayırın ve kendiliğinden bağlanan küreleri çıkarın. Küre sağlığını korumak ve nekrotik çekirdeklerden kaçınmak için küreleri haftada bir kez nazikçe kırın.
      NOT: Ayırma solüsyonu ile 5 dakikalık tedaviyi aşmayın.
2. hNeuron'ları veya iNeuron'ları 2B tek katmandan ayırın.
   1. Ortamı 6 oyuklu plakadan çıkarın ve hNeuron (insan nöronu) veya iNeur....

Sonuçlar

Şekil 1: Biyomühendislik ürünü 3D nöral kürelerin sistematik ve tekrarlanabilir üretimi. (A) Mikrokuyu (μ-kuyucuk) kültür plakaları, sistematik ve kullanıcı tarafından belirlenen bir şekilde istenen yoğunlukta ve nöron-astrosit oranlarında 3D nöral küreler oluşturmak için kullanılır ve tutarlı boyut ve şekil verir. Görüntüler küre oluşumundan 1 gün sonra gösterilir. Ölçek çubukları = .......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
6 kuyulu plaka	Balıkçı Bilimsel	08-772-1B
15 ml konik tüpler	Olympus Plastik	28-101
Aktataz	Sigma	A6964-100ML	Ayırma çözümü
AggreWell plakası	Kök Hücre Teknolojileri	34850
Yapışma Önleyici Durulama Solüsyonu	Kök Hücre Teknolojileri	7010	Mikrokuyu plakalarına hücre yapışmasını önleyin
Anti/anti	Termo Balıkçı	15240062
B27	Termo Balıkçı	17504044	Medya Eki
BrainPhys nöronal ortam	Kök Hücre Teknolojileri	5790	Nörofizyolojik bazal ortam alternatifi
DMEM/F12	Termo Balıkçı	10565-042	GlutaMAX takviyesi ile
DMH-1	Kök Hücre Teknolojileri	73634	TEHLİKE: Yutulması halinde toksiktir. Çalışma konsantrasyonu: 2 uM
Eşek serumu	Lampire Biyoloji Laboratuvarları	7332100	Çalışma konsantrasyonu: Birincil engelleme tamponunda %5, ikincil engelleme tamponunda %1
Doksisiklin Hidroklorür (Dox)	Sigma	D3072-1ml	TEHLİKE: Hamile kadınlar için toksiktir. Çalışma konsantrasyonu: 2 ug / mL
Epidermal büyüme faktörü (EGF)	Peprotech teknolojisi	AF-100-15	Çalışma konsantrasyonu: 10 ng/mL
Fibroblast büyüme faktörü-2 (FGF)	Peprotech teknolojisi	100-18B	Çalışma konsantrasyonu: 10 ng/mL
Hematitometre veya otomatik hücre sayacı	Yaşam Teknolojileri	AMQAX1000
Matrigel membran matrisi	Corning	354230	ECM kaplama çözümü. Çalışma konsantrasyonu: 80 ug / ml. Buz üzerinde hazırlayın ve pipetlerin, tüplerin ve ortamın önceden soğutulduğundan emin olun.
MEA 2100 Sistemi	Çok Kanallı Sistemler	MEA2100
Rho-kinaz inhibitörü Y27632- (Y)	Tocris (Türkçe)	1254	Çalışma konsantrasyonu: 10 uM
SB431542	Kök Hücre Teknolojileri	72234	Çalışma konsantrasyonu: 2 uM
Eğirme şişeleri	Balıkçı Bilimsel	4500-125
T25 Kültür Şişesi	Olympus Plastik	25-207	Havalandırmalı kapaklar
Tripan mavisi	Canlandırıcı	T10282

Serisi Adet Sertifikası Serisi Serisi Serisi arası arası Serisi