$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. Nöral kök hücre indüksiyonu
NOT: Hücre koşullarına bağlı olarak, transfeksiyondan yaklaşık 5 veya 7 gün sonra, tek katmanlı yapışık hücreler %30 - 50 birleşmeye ulaşacaktır (Şekil 1C).
- Yüzen hücreler ve küreler içeren süpernatanları çıkarın ve ardından 1 ml nöral progenitör ortam (Dulbecco'nun Modifiye Eagle Medium: Besin Karışımı F-12 (DMEM / F12), 1x N2 takviyesi,% 0.1 (a / h) sığır serum albümini (BSA),% 1 (h / h) antibiyotikler, 20 ng / ml bazik fibroblast büyüme faktörü (bFGF) ve 20 ng / ml epidermal büyüme faktörü (EGF)) ekleyin.
- İsteğe bağlı olarak, hücreleri 10 dakika boyunca 170 x g'da nazikçe pipetleyerek ve santrifüjleyerek hücre kürelerini ayırın. Süpernatanı çıkarın ve hücreleri, yedek olarak talimat başına matrigel ile kaplanmış 24 oyuklu yeni bir plakada 1 ml nöral progenitör ortamda yeniden süspanse edin.
- Hücreler %60 - 80 birleşene kadar, genellikle 1 hafta sonra ortamı her gün değiştirin.
- Süpernatanı atın ve 1 ml nöral kök hücre ortamı (serumsuz ortam, NSC SFM) ekleyin. Bir hücre kazıyıcı kullanarak hücreleri ayırın ve ardından çok nazik pipetleyin.
- Hücreleri çıkarın ve hepsini 6 oyuklu bir plakanın bir kuyusuna tohumlayın. Her kuyucuk için 2 ml ortam yapmak için 1 ml daha nöral kök hücre ortamı ekleyin. Hücreleri 37 °C'de% 5 CO2 inkübatörde inkübe edin.
- Ortamı iki günde bir değiştirin.
- Hücreler %60 birleşmeye ulaştığında, 1.4 ve 1.6'daki adımları izleyerek hücreleri 1: 3 oranında ayırın ve yeniden plakalayın.
