Hematopoetik Progenitör Hücrelerin Nöral Kök Hücrelere Doğrudan Yeniden Programlanması

Özet

Kaynak: Wang, T., et al. Periferik Kan Hematopoietik Progenitör Hücrelerinden İnsan Nöral Kök Hücrelerinin Doğrudan İndüksiyonu. J. Vis. Uzm, (2015)

Bu video, genetik olarak değiştirilmiş hematopoietik progenitör hücrelerin nöronal kök hücrelere doğrudan yeniden programlanmasını göstermektedir. Hematopoietik progenitör hücreler tarafından eksprese edilen transkripsiyon faktörleri, dönüşümlerini kolaylaştıran bir dizi moleküler olayı tetikler. İndüklenmiş nöronal kök hücreleri seçmek ve büyütmek için daha spesifik ortamlar kullanılır.

Protokol

1. Nöral kök hücre indüksiyonu

NOT: Hücre koşullarına bağlı olarak, transfeksiyondan yaklaşık 5 veya 7 gün sonra, tek katmanlı yapışık hücreler %30 - 50 birleşmeye ulaşacaktır (Şekil 1C).

1. Yüzen hücreler ve küreler içeren süpernatanları çıkarın ve ardından 1 ml nöral progenitör ortam (Dulbecco'nun Modifiye Eagle Medium: Besin Karışımı F-12 (DMEM / F12), 1x N2 takviyesi,% 0.1 (a / h) sığır serum albümini (BSA),% 1 (h / h) antibiyotikler, 20 ng / ml bazik fibroblast büyüme faktörü (bFGF) ve 20 ng / ml epidermal büyüme faktörü (EGF)) ekleyin.
2. İsteğe bağlı olarak, hücreleri....

Sonuçlar

Şekil 1. Sendai virüsü transfeksiyonu sonrası CD34 hücrelerinin morfolojik değişiklikleri. (A) Transfeksiyon sırasında önemli sayıda CD34 hücresi gözlenebilir. (B) Küre benzeri hücre agregatları, zaman içinde genişleyen Sendai virüsü transfeksiyonundan 24 saat sonra gözlemlenebilir. (C) Çoğunlukla, bipolar yapışık hücreler transfeksiyondan 5 gün sonra.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Hücre kazıyıcı	Sarstedt	83.183
DMEM/F12	Yaşam teknolojileri	12400-024	1 katı
N2 takviyesi	Yaşam teknolojileri	17502-048	1 katı
Sığır serum albümini	Sigma	A2934	%0,1 (a/h)
bFGF (İngilizce)	Peprotech teknolojisi	100-18B	20 ng/ml
EGF (Türkçe)	Peprotech teknolojisi	AF-100-15
B27 takviyesi	Yaşam teknolojileri	17504-044	1 katı
NSC serum içermeyen besiyeri	Yaşam Teknolojileri	A1050901	1 katı

Belediyesi Serisi Serisi Serisi