Yöntem makalesi

İndüklenmiş Nöral Progenitör Hücrelerin Astrositlere Farklılaşması

8 Temmuz 2025

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Meyer, S., et al., Edenhofer, F. Yetişkin İnsan Fibroblastlarının Türetilmesi ve Genişletilebilir Nöral Progenitör Hücrelere Doğrudan Dönüşümü. J. Vis. Uzm. (2015)

Bu video, indüklenmiş nöral progenitör hücreleri (iNPC'ler) özel ortamlar kullanarak nöronlara ve astrositlere ayırma sürecini göstermektedir.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. iNPC'lerin farklılaşması

  1. Nöronal soya doğru farklılaşma
    1. Yukarıda tarif edildiği gibi laminin kaplı plakalar üzerindeki kültür hücreleri. Hücreler yaklaşık% 70 birleştiğinde ortamı nöro-diff-media (DMEM / F-12, 1x N2, 1x B27, 300 ng / ml cAMP, 200 μM C vitamini, 10 ng / ml BDNF, 10 ng / ml GDNF) olarak değiştirin. Üç hafta boyunca her gün medyayı değiştirin. Farklılaşma sırasında hücreleri bölmeyin.
    2. Üç hafta sonra, hücreler nöronal belirteç TUJ1'i eksprese etmelidir. Daha olgun nöronlar ve nöronal alt tipler kazanmak için farklılaşmaya 3 aya kadar devam edin.
  2. Glial soya doğru farklılaşma
    1. Ortamı glial indüksiyon ortamına değiştirin (1: 1 DMEM / F-12: Nörobazal, 1x N2, 1x B27, 10 μM β-merkaptoetanol, 100 μM esansiyel olmayan amino asitler, 1.5 mM L-Glutamin, 5 μg / ml insülin, 40 ng / ml T3) glial öncü hücrelere farklılaşmayı indüklemek için 20 ng / ml EGF dahil. Ortamın yarısını çıkarın ve yaklaşık 2 hafta boyunca her gün yeni ortamla değiştirin. Bu süre zarfında,% 100 birleşmeye ulaşıldığında 10 μM ROCK inhibitörü Y27632 varlığında hücreler 1: 3 oranında bölünmelidir.
    2. 2 hafta sonra, hücreleri astrositlere daha fazla farklılaştırın: hücreler neredeyse birleştiğinde, ortamı ticari olarak satılan astrosit ortamına değiştirin, ortamı her iki günde bir değiştirin. Yaklaşık 7 gün sonra, hücreler astrosit belirteçlerini (örneğin, GFAP) eksprese etmeye başlar. Farklılaşma protokolü sırasında hücreler %100 birleşirse, bunları 10 μM ROCK inhibitörü Y27632 varlığında 1:2 oranında bölün.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Astrosit ortamıScienCell (Bilimsel)1801
B27Yaşam Teknolojileri17504-044
BDNF (BDNF)Peprotech teknolojisi450-02
kampSigmaA6885
DMEM (Ömer ÇiçeğYaşam Teknolojileri41966-029
DMEM F12Yaşam Teknolojileri11320-033
DMSO (Türkçe)Roth4720
DPBS (DPBS)Yaşam Teknolojileri14190-094
EGF (Türkçe)Yaşam TeknolojileriPHG0313
FcsBiochrom AG50115
GDNF (Yurt İçi Finans SantraliPeprotech teknolojisi450-10
InsülinSeralab LaboratuvarıMÜCEVHER-700-112-P
L-GlutaminYaşam Teknolojileri25030-024
LamininSigmaL2020
N2Yaşam Teknolojileri17502-048
NörobazalYaşam Teknolojileri21103-049
Esansiyel olmayan amino asitlerYaşam Teknolojileri11140-050
C vitaminiSigmaA4544
β-MerkaptoetanolYaşam Teknolojileri21985023
Yapımı Sertifikası Serisi Serisi adet Yılı Serisi

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Astrosit DiferansiyasyonuGlial nd ksiyon BesiyeriN ronal Marker TuJ1Rho kinaz nhibit rEpidermal B y me Fakt rH cre D Matriks KaplamaBesiyeri De i tirme ProtokolH cre ProliferasyonuGlial Prek rs r H creler

İlgili makaleler