Murin serebellar granüler nöron progenitörlerinin izole edilmesi ve kültürlenmesi

Özet

Kaynak: Bovio, P., et al., Nöral Progenitörlerin İzolasyonu ve Kültivasyonu Ardından Histon 3 Lizin 79 Dimetilasyon İşaretinin Kromatin-İmmünopresipitasyonu. (2018)

Bu video, bir fare yavrusunun beyinciğinden serebellar nöral progenitör hücrelerin izolasyonunu ve yetiştirilmesini göstermektedir. Serebellar granül nöron progenitörleri, astrositleri etkili bir şekilde uzaklaştırarak diferansiyel adezyon yoluyla izole edilir ve saflaştırılır. Bu kültürlenmiş progenitörler daha sonra serebellar granül nöronlarına farklılaşır.

Protokol

Numune toplama ile ilgili tüm prosedürler enstitünün IRB yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir.

1. Hazırlıklar

1. CGNP (serebellar granüler nöron progenitör) izolasyonu için hazırlıklar
   1. Beyincik'i izole etmek için P5-P7 hayvanları oluşturmak için uygun bir fare çiftleşmesi düzenleyin (ChIP ve durum başına 3-5 hayvan).
   2. HBSS tamponuna 6 mg / mL glikoz ekleyerek HBSS / Glikoz hazırlayın.
   3. DMEM-F12'ye %1 (h/h) N2 takviyesi, %1 (h/h) Penisilin-Streptomisin-Neomisin, 25 mM KCl ve %10 FCS ekleyerek CGNP hücre kültürü ortamını (CGM) hazırlayın. CG....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
B27 Takviyesi (50x)	Yaşam Teknolojileri	17504044	Kategori: Hücre kültürü Kısaltma/Yorum: CCM için
DMEM-F12	Yaşam Teknolojileri	11320-033	Kategori: Hücre kültürü Kısaltma/Yorum: CGM için
Fetal Sığır Serumu %10 (h/h)	Gibco (Gibco)	10082147	Kategori: Hücre kültürü Kısaltma/Yorum: TBM izolasyonu ve CGM için
glikoz	Sigma-Aldrich	G5767	Kategori: Hücre kültürü Kısaltma/Yorum: CGNP izolasyonu için
Glutatyon (1.25 mg / ml)	Sigma-Aldrich	G4251	Kategori: Hücre kültürü Kısaltma/Yorum: CCM için
glisin	Carl Roth'un fotoğrafı	3187	Kategori: ChIP Kısaltma/Yorum: Hücre fiksasyonu için
Hank'in Dengeli Tuz Çözeltisi	Yaşam Teknolojileri	14025-100	Kategori: Hücre kültürü Kısaltma/Yorum: HBSS
L-glutamin (200 mM)	Yaşam Teknolojileri	25030081	Kategori: Hücre kültürü Kısaltma/Yorum: CCM için
Laminin	Sigma-Aldrich	L2020	Kategori: Hücre kültürü Kısaltma/Yorum: TBM kültürü için
N2 takviyesi	Yaşam Teknolojileri	17502048	Kategori: Hücre kültürü Kısaltma/Yorum: CGM için
Nörobazal ortam	Gibco (Gibco)	21103049	Kategori: Hücre kültürü Kısaltma/Yorum: CCM için
Penisilin-Streptomisin-Neomisin %1 (h/h)	Yaşam Teknolojileri	15640055	Kategori: Hücre kültürü Kısaltma/Yorum: PSN, CCM ve CGM için
Fosfat tamponlu salin	Yaşam Teknolojileri	10010023	Kategori: Hücre kültürü Kısaltma/Yorum: PBS, TBM izolasyonu için
Poli-D-lizin	Sigma-Aldrich	P6407 Serisi	Kategori: Hücre kültürü Kısaltma/Yorum: CGNP izolasyonu için
Poli-L-ornitin hidrobromür	Sigma Aldrich	P3655 Serisi	Kategori: Hücre kültürü Kısaltma/Yorum: TBM kültürü için
Potasyum klorür	Termo Balıkçı	AM9640G	Kategori: Hücre kültürü Kısaltma/Yorum: KCl, CGM için
Sonik kirpi (SHH)	Sigma-Aldrich	SRP6004	Kategori: Hücre kültürü Kısaltma/Yorum: CGNP izolasyonu için
Süperoksit dismutaz (1mg / ml)	Sigma-Aldrich	S7571 Serisi	Kategori: Hücre kültürü Kısaltma/Yorum: CCM için
Tripsin-EDTA %0,05 (a/h)	Sigma Aldrich	59417C	Kategori: Hücre kültürü Kısaltma/Yorum: TBM izolasyonu için

Serisi Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi . arası Gazetesi Yılı Gazetesi · Gazetesi Gazetesi ·