Bölümlere Ayrılmış Bir Mikroakışkan Cihaz Kullanılarak Nöral Kök Hücrelerin Nöronlara Farklılaşması

Özet

Kaynak: Paranjape, S. R., et al. İnsan Kök Hücresinden Türetilmiş Nöronların Önceden Monte Edilmiş Plastik Mikroakışkan Çipler İçinde Bölümlere Ayrılması. J. Vis. Uzm. (2019)

Video, bir mikro oluk bariyeri ile ayrılmış somatik ve aksonal bir bölme içeren bir mikroakışkan cihaz kullanılarak nöral kök hücrelerin (NSC'ler) farklılaşmasını göstermektedir. NSC'ler somatik bölmeye sokulur ve yapışmalarına izin verilir. NSC'ler somatik bölme içindeki nöronlara farklılaşır ve aksonları mikro oluk bariyerinden aksonal bölmeye kadar uzatır.

Protokol

>NOT: Şekil 1A, B, ana kanalların veya bölmelerin, kuyuların ve mikro olukların konumları dahil olmak üzere önceden monte edilmiş döngüsel olefin kopolimer (COC) çipinin bir şemasını göstermektedir. Bölümlere ayrılmış çip, gıda boyası boyasının izolasyonu ile gösterildiği gibi bir bölme içinde farklı akışkan mikro ortamlar oluşturabilir (Şekil 1C).

1. hSC nöronları için çok bölmeli çiplerin kaplanması

NOT: Şekil 2A, kaplama prosedürlerine genel bir bakış göstermektedir.

1. 20 μg/mL'lik bir çalışma çözelt....

Sonuçlar

Şekil 1: Önceden monte edilmiş COC, çok bölmeli mikroakışkan çip. (A) Üst ve alt kuyuları tanımlayan çipin bir çizimi. Çipin boyutu, standart mikroskop slaytlarının boyutu olan 75 mm x 25 mm'dir. (B) Kanalları ve kanalları ayıran mikro olukları gösteren yakınlaştırılmış bir bölge. (C) Bu fotoğraf, gıda boyası boyası kullanılarak her bölmede izole edil.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Komple Nöral Kök Hücre Ortamı:
REC HU EGF 10 UG BIYOLOJIK KAYNAK (TM)	ThermoFisher Bilimsel	PHG0314	20 ng/mL
KAYIT HU FGF TEMEL 10 UG BIYOLOJIK KAYNAK (TM)	ThermoFisher Bilimsel	PHG0024	20 ng/mL
GlutaMAX Takviyesi (100X)	ThermoFisher Bilimsel	35050061	2 milyon
Nakavt DMEM/F-12	ThermoFisher Bilimsel	12660012
StemPro Sinir Takviyesi	ThermoFisher Bilimsel	A1050801	%2
Kalsiyum ve Magnezyum içermeyen Gibco DPBS	ThermoFisher Bilimsel	14190144
GIBCO İNSAN NSC (H9) KITI COMBO KITI	Gibco (Gibco)	N7800200
Gibco Laminin	ThermoFisher Bilimsel	23017015
Cam Pastör pipetleri	Sigma-Aldrich	CLS7095D5X SIGMA	5.75 inç uzunluğu
H9'DAN TÜRETILMIŞ HU NÖRAL KÖK HÜCRE 1E6 HÜCRELERI/ŞIŞESI; 1 ML	ThermoFisher Bilimsel	510088
hazırda bekletme-E Ortamı	ThermoFisher Bilimsel	A1247601
İnkübatör, %5 CO2 37 °C
Bay Ayaz	ThermoFisher Bilimsel	5100-0001
Nöral farklılaşma ortamı			100 mL başına.
Antibiyotik-Antimikotik (100x)	ThermoFisher Bilimsel	15240112	1 mL (100X)
Askorbik asit	Sigma Aldrich	A8960	200 milyon
BDNF (BDNF)	ThermoFisher Bilimsel	PHC7074	40 ng/mL
Gibco B27 Plus Takviye Edici Gıda (50X)	Balıkçı Bilimsel	A3582801	2 mL (50 kat)
Gibco CultureOne Takviyesi (100X)	Balıkçı Bilimsel	A3320201	1 mL (100X)
Gibco Nörobazal Artı Orta	Balıkçı Bilimsel	A3582901
StemPro Accutase Hücre Ayrışma Reaktifi	ThermoFisher Bilimsel	A1110501
XC ön kaplama	Xona Mikroakışkanlar, LLC	XC Ön Kaplama	XonaChips'e dahildir
Xona Çip	Xona Mikroakışkanlar, LLC	XC450	450 μm uzunluğunda mikro oluk bariyeri
Nemlendirici Tepsisi	Xona Mikroakışkanlar, LLC	nemlendirici tepsisi

Gazetesi · Serisi Serisi