İnsan Embriyonik Kök Hücrelerinden Beyin Organoidleri Üretme Tekniği

Özet

Kaynak: Boisvert, E. M., et al. İnsan Embriyonik Kök Hücrelerinden Beyin Organoidleri Üretmek İçin Statik Kendi Kendini Yöneten Bir Yöntem. J. Vis. Exp (2020).

Bu videoda, insan embriyonik kök hücrelerinden (hESC'ler) serebral organoidler üretmeye yönelik bir teknik gösterilmektedir. hESC kolonilerinin yapışık kültürü, onları ayırmak ve kümelere ayırmak için enzimlerle muamele edilir. Bu kümeler, süspansiyon halinde üç boyutlu küreler oluşturur ve bunlar daha sonra nöron katmanları ve glial hücrelerle beyin korteksini taklit eden organoidlere farklılaşmak için indüklenir.

Protokol

1. Kök Hücre Bakımı

1. H9 hESC'leri, üreticinin talimatlarına göre bir büyüme faktörü azaltılmış bazal membran matrisi tabakası üzerinde tutun (Malzeme Tablosuna bakın, bundan böyle basitçe matris olarak anılacaktır).
   1. Bir adet 6 oyuklu plakayı veya bir adet 10 cm'lik tabağı kaplamak için 100 μL matrisi 5,9 mL buz gibi soğuk Dulbecco'nun modifiye Eagle ortamı (DMEM)/F12 ortamıyla birleştirin. Plakaları parafin filme sarın ve gece boyunca 4 ° C'de saklayın. Fazla matris / ortam aspire edildikten sonra hücreleri geçirmek için ertesi gün kullanın.
2. Hücreleri haftadan haftaya her 7 günde bir yakl....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
B27 Takviyesi	Gibco, Waltham, MA, Amerika Birleşik Devletleri	17504-044
bFGF (İngilizce)	Yaşam Teknolojileri, Carlsbad, CA, ABD	PHG0263
Bsa	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Amerika Birleşik Devletleri	A9647
Dağıtma	STEMCELL Teknolojileri, Vancouver, Kanada	7913
DMEM/F12	Thermo Fisher Bilimsel, Waltham, MA, ABD	11330-032
DPBS (DPBS)	Gibco, Waltham, MA, Amerika Birleşik Devletleri	10010023
Büyüme Faktörü Azaltılmış Matrigel (Matris)	Corning, Corning, NY, Amerika Birleşik Devletleri	356231
H9 hESC'ler	WiCell, Madison, WI, Amerika Birleşik Devletleri	WA09
Heparin	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Amerika Birleşik Devletleri	9041-08-01
L-glutamin	Gibco, Waltham, MA, Amerika Birleşik Devletleri	25030-081
Monotiyokliserol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Amerika Birleşik Devletleri	M6145
mTESR ortamı	STEMCELL Teknolojileri, Vancouver, Kanada	85850
N2 NöroPlex	Gemini Biyo Ürünleri, West Sacramento, CA, ABD	400-163
NEAA (NEAA)	Gibco, Waltham, MA, Amerika Birleşik Devletleri	11140-050
Triton X-100	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Amerika Birleşik Devletleri	T8787-100ML
Ultra düşük ataşmanlı T75 şişeler	Corning, Corning, NY, Amerika Birleşik Devletleri	3814

Serisi Serisi Serisi Serisi arası Serisi Serisi