Bir Fare Beyninden Amigdala Bölgelerini Açığa Çıkaran Koronal Beyin Dilimi Oluşturma

Bu makalede

Özet

Kaynak: Bosch, D., et al. Beyin dilimlerinde korku devrelerinin ex vivo optogenetik diseksiyonu. J. Vis. Uzm. (2016).

Bu video, medial prefrontal korteksten sinaptik bağlantılar açısından zengin amigdala bölgelerini açığa çıkaran bir murin beyninden ince koronal beyin dilimlerinin hazırlanmasını göstermektedir. Dilimler daha sonra nöronal canlılığı korumak için oksijenli yapay beyin omurilik sıvısında geri kazanılır.

Protokol

1. Akut Dilimlerin Hazırlanması

ACSF, kesme solüsyonu, aletler (makas, neşter, forseps, spatula, Pasteur pipeti) ve agar blokları hazırlayın.
NOT: Deney başına 1 L yapay beyin omurilik sıvısı (ACSF) gereklidir. Daha önce yayınlandığı gibi, ACSF, kimyasalların çift damıtılmış H2O içinde çözülmesiyle hazırlanır. Kesme çözeltisi, 200 ml ACSF'nin 0.87 ml 2 M_MgS04 stok çözeltisi ile desteklenmesiyle hazırlanır.
Deney boyunca %95_O2 ve %5 CO₂ ile ACSF ve kesme solüsyonunu oksijenlendirin.
İzofluran (% 3 oksijen) kullanarak küçük bir hayvan anestezi makinesi kullanarak fareyi derinlemesine uyuşturun. Devam etmeden önce uzuv çekme refleksini kullanarak anestezi derinliğini kontrol edin.
Büyük bir makas kullanarak farenin kafasını kesin ve kafayı hemen buz gibi soğuk bir kesme solüsyonunda soğutun.
Kafatasını kaudalden rostral'a tek bir orta hat kesisi ile açın ve kafatasının parçalarını forseps kullanarak yavaşça yanlara doğru itin. Küçük yuvarlak bir spatula kullanarak beyni nazikçe kafatasından kaldırarak hızla çıkarın. Beyincik neşter ile kesin. Beyni buz gibi soğuk bir kesme solüsyonuna yerleştirin.
mPFC enjeksiyon bölgeleri için, beynin ön kısmını (mPFC içeren) kesmek için bir neşter kullanın ve dilimleyene kadar buz gibi soğuk bir kesme solüsyonuna koyun.
Fazla kesme solüsyonunu filtre kağıdı ile çıkarın ve beynin arka kısmını vibratom aşamasına yapıştırın.
Koronal amigdala dilimleri, MGm/PIN enjeksiyon bölgeleri ve mPFC enjeksiyon bölgeleri için beyni doğrudan sahneye yapıştırın (Şekil 1D, sol ve sağ). Dilimleme sırasında stabilite için beynin arkasına ek bir agar bloğu yerleştirin.
Sahneyi, bir soğutma ünitesi kullanılarak 4 °C'de tutulan buz gibi oksijenli bir kesme solüsyonuna sahip bir kesme odasına yerleştirin. Safir bir bıçak kullanarak, amigdalanın koronal dilimlerini hazırlayın. Dilimleri RT'de oksijenli ACSF ile sağlanan bir arayüz odasına yerleştirin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

figure-results-1
Şekil 1. stereotaktik enjeksiyonlar, akut beyin dilimlerinin hazırlanması ve presinaptik liflerin görselleştirilmesi. (A, B) Stereotaktik virüs enjeksiyonu. A) Kafatası açıkta ve enjeksiyon pipeti açıkta olacak şekilde stereotaktik bir çerçeveye yerleştirilmiş anestezi uygulanmış bir farenin resmi. İç: Hızlı yeşil ile karıştırılmış virüs çözeltisi ile doldurulmuş enjeksiyon pipetinin ...