Floresanla Aktive Edilen Çekirdek Sıralaması Kullanılarak Beyin Dokusundan Hücre Popülasyonlarının İzole Edilmesi

Özet

Kaynak: Mussa, Z., et al. Floresanla Aktive Edilen Çekirdek Sıralama Kullanılarak Yetişkin İnsan Astrosit Popülasyonlarının Taze Donmuş Korteksten İzolasyonu. J. Vis. Uzm. (2021)

Bu video, çeşitli nörolojik uygulamalar için farklı hücre popülasyonlarının incelenmesini sağlayan floresanla aktive edilen çekirdek ayıklama (FANS) kullanarak taze donmuş insan beyin dokusundan çekirdekleri izole etme ve ayırma prosedürünü göstermektedir.

Protokol

Numune toplama ile ilgili tüm prosedürler enstitünün IRB yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir.

1. Tampon hazırlama

>NOT: Aşağı akış RNA dizilimi gerçekleştiriyorsanız, mRNA bozulmasını önlemek için tüm çalışma alanlarını ve araçları RNase Dekontaminasyon Solüsyonu ile kapsamlı bir şekilde tedavi edin.

1. Lizis tamponu hazırlayın.
   1. Aşağıdakileri 50 mL'ye kadar damıtılmış suda (H₂O) çözün: 5.47 g sükroz (0.32 M final), 250 μL 1 M kalsiyum klorür (CaCl₂) (5 mM final), 150 μL 1 M magnezyum asetat (Mg (CH₃COO) ₂) (3 mM final), 1....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
10x PBS pH 7.2	Canlandırıcı	70013073
ANTI-NEUN ANTIKOR KLONU A60	Kırlangıç	MAB377A5MI	bir floresan bileşiği AF555'e konjuge fare anti-NeuN (uyarma, 553 nm; emisyon, 568 nm)
ANTI-OLIG2 ANTIKOR KLONU 211	Kırlangıç	MABN50A4MI	bir floresan bileşiği AF488'e konjuge fare anti-OLIG2 (uyarma, 499 nm; emisyon, 520 nm)
Sığır Serumu Albümini	balıkçı	BP9704-100
Parlak Çizgi Sayma Odası	Hausser Bilimsel	3110V
Susuz Kalsiyum Klorür	balıkçı	C614-3
Hücre Süzgeçleri, 40 μM	SP Bilim Yazılımı	136800040
DAPI (4',6-Diamidino-2-fenilindol, dihidroklorür)	Canlandırıcı	D1306
Dounce Doku Öğütücü	Wheaton	357542
FACS Sıralayıcı	BD Biyolojik Bilimler		BD FACSAria III
Magnezyum Asetat Tetrahidrat	balıkçı	M13-500
PAX6 (PAX6/496) - 100 TEST	Novus	NBP234705J
Sükroz, kristal sertifikalı, ACS, 500 mg	balıkçı	S5500 Serisi
SW 41 Ti Sallanan Kova Rotoru	Beckman Coulter'ın fotoğrafı.	331362
Tris-HCl, 1M Çözelti, pH 8.0, Moleküler Biyoloji Sınıfı, Ultra Saf	Termo Bilimsel	J22638AE
TritonX-100	balıkçı	BP151-500	lizis tamponunda iyonik olmayan yüzey aktif madde
Tripan Mavisi Çözeltisi, %0,4	Gibco (Gibco)	15250061
Ultrasantrifüj	Beckman Coulter Optima XE-100	A94516
Ultrasantrifüj tüpleri PP 9/16 X 3-1 / 2	Beckman Coulter'ın fotoğrafı.	331372
UltraPure Distile Su (RNAse-, DNAse-free)	Canlandırıcı	10977023	damıtılmış su olarak adlandırılır
Ultra saf EDTA	Yaşam Teknolojileri	15576-028

Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi İkinci El Serisi