Otik progenitör hücrelerin duyusal epitel hücrelerine farklılaşması ve ardından immün boyama

Özet

Kaynak: Azadeh, J. et al., Ölümsüzleştirilmiş Multipotent Otic Progenitör Hücrelerde Farklılaşmanın Başlatılması.J. Vis. Uzm. (2016).

Bu video, ölümsüzleştirilmiş multipotent otik progenitör (iMOP) hücrelerin duyusal epitel hücrelerine farklılaşmasını göstermektedir. Başarılı hücre farklılaşmasını doğrulamak için iMOP hücrelerinin kültürlenmesi, otosferlerin oluşturulması, farklılaşmanın indüklenmesi ve hücresel bileşenlerin ve farklılaşma belirteçlerinin floresan mikroskobu aracılığıyla görselleştirilmesiyle ilgili adımları ana hatlarıyla belirtir.

Protokol

1. IMOP Hücrelerinde Kendini Yenilemeyi Sürdürme

1. iMOP kültür ortamını hazırlayın: DMEM/F12, 1X B27 takviyesi, 25 μg/ml karbenisilin ve 20 ng/ml bazik fibroblast büyüme faktörü (bFGF). Steril reaktifler kullanarak 50 ml iMOP kültür ortamı yapın. 49 ml DMEM/F12'yi 37 °C'lik bir su banyosunda 50 ml'lik bir konik içinde ısıtın.
   1. 50X B27 takviyesi ve filtreyle sterilize edilmiş 100 mg / ml karbenisilin alikotlarını 37 ° C'lik bir su banyosunda 5 dakika boyunca çözdürün. RT'de 100 μg / ml bFGF alikotunu çözün. DMEM / F12'ye 1 ml 50X B27, 10 μl 100 μg / ml bFGF ve 12.5 μl 100 mg / ml karbenisilin ekleyin.
2. iMOP h....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
1.5 Kalınlık Cam Lamel (Yuvarlak 12 mm)	Elektron Mikroskobu Bilimleri	72230-01
DMEM/F12	Yaşam Teknolojileri	11320-082
Fosfat Tamponlu Tuzlu Serum Fizyolojik (PBS) pH 7.4	Yaşam Teknolojileri	10010-023
Hank'in Dengeli Tuz Çözeltisi (HBSS)	Yaşam Teknolojileri	14025-092
B27 Takviyesi (50X) Serum İçermez	Yaşam Teknolojileri	17504-044	1 ml alikot olarak saklanır
Prolong Altın Antifade Mountant	Yaşam Teknolojileri	47743-736	10 mg / ml 100 μl alikot olarak saklanır
Moxi Z Mini Otomatik Hücre Sayacı	Orflo	MXZ001
Moxi Z Kaset Tipi S	Orflo	MXC002
Rekombinant Murin Fibroblast Büyüme Faktörü, bazik (bFGF)	Peprotech teknolojisi	450-33	H20'de% 0.1 BSA'da yeniden süspanse edildi ve 20 mg / ml alikotlar olarak saklandı
Karbenisilin, Disodyum Tuzu	Thermo Fisher Bilimsel	BP2648-1	10mM Hepes pH 7.4'te yeniden süspanse edilir ve 100 mg / ml alikot olarak saklanır
5 ml pipet ayrı ayrı sarılmış karton kapaklı (200/kutu)	Thermo Fisher Bilimsel	1367811D
10 ml pipet ayrı ayrı sarılmış karton kapaklı (200/kutu)	Thermo Fisher Bilimsel	1367811D
Doku Kültürü İşlem Görmüş 6 cm Tabak	Thermo Fisher Bilimsel	130181
TipOne filtre pipet uçları 0.1-10 ul uzatılmış filtre ucu	ABD Bilimsel	1120-3810
TipOne filtre pipet uçları 1-20 ul filtre ucu	ABD Bilimsel	1120-1810
TipOne filtre pipet uçları 1-200 ul filtre ucu	ABD Bilimsel	1120-8810
TipOne filtre pipet uçları 101-1000 ul filtre ucu	ABD Bilimsel	1126-7810
15 ml Konik Tüpler Steril 20 torba 25 tüp (500 tüp)	ABD Bilimsel	1475-0511
50 ml konik tüp steril 20 torba 25 tüp (500 tüp)	ABD Bilimsel	1500-1211

Serisi Belediyesi Serisi Belediyesi Serisi Serisi arası