Fare Beyinlerinden Medial Talamus-Anterior Singulat Korteks Dilimlerinin Üretilmesi

Özet

Kaynak: Lu, H., et al. Farelerde Nöbet Benzeri Aktivitenin Doğru Akım Stimülasyonu ve Çok Elektrotlu Dizi Kaydı Beyin Dilimi Hazırlığı. J. Vis. Uzm. (2016)

Video, fare beyinlerinden medial talamus-anterior singulat korteks (MT-ACC) dilimlerinin hazırlanışını göstermektedir. Bir farenin beyni disseke edilir, MT-ACC yolunu ortaya çıkarmak için kesikler yapılır ve bir vibratom kullanılarak dilimler oluşturulur. MT-ACC dilimleri daha sonra oksijenli yapay beyin omurilik sıvısında tutulur.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Beyin Dilimi Hazırlama

1. 4-8 haftalık erkek C57BL / 6J fareleri kullanın. Hayvanları klimalı bir odada (21-23 °C; %50 nem; 12 saat/12 saat aydınlık/karanlık döngüsü, ışıklar 08:00'de açık) yiyecek ve suya ücretsiz erişimi olan bir yerde barındırın.
2. Yapay beyin omurilik sıvısının (aCSF) 250 ml'lik bir alikotunu alın ve buz içeren bir behere yerleştirin. Aynı zamanda, %95_O2 ve %5 CO_2'den oluşan sürekli gaz sağlayın.
3. ameliyat
   1. Hayvanı yaklaşık 3 dakika boyunca bir cam kutuda% 4 izofluran ile uyuşturun. Hayvan cerrahi bir anestezi derinliğine ulaştığında (ayak parmağının sıkışmasına yanıt verilmemesi ile gösterilir), kırılmış buzla doldurulmuş sığ bir tepsiye yerleştirin ve makas kullanarak kafayı çıkarın.
   2. Kafatasını açığa çıkarın ve kalan kası kesin. Daha sonra, rongeurs kullanarak, kafatasının dorsal yüzeyini beyinden soyun. Rongeurs kullanarak kafatasının kenarlarını kesin. Tüm cerrahi aletleri% 75 etanol çözeltisi ile sterilize edin.
   3. Bir spatula kullanarak, beynin ventral yüzeyi boyunca koku soğancıklarını ve sinir bağlantılarını kesin ve beyni çıkarın. Dekapitasyondan sonra, beyni hızlı bir şekilde buz gibi soğuk oksijenli aCSF ile doldurulmuş bir behere aktarın.
4. Medial Talamus (MT)-Anterior Singulat Korteks (ACC) Beyin Dilimi
   Hazırlanması not: MT'den ACC'ye giden yolu içeren dilimler hazırlayın.
   1. Subkortikal anatomiyi görüntülemek için beyin bloğunu her yarım kürede orta çizginin 2.0 mm lateralinde iki sagital kesi ile elle kesin. Ardından iki açılı kesim yapın. Striatumdaki görünür lif yoluna paralel olarak ilk çapraz kesimi yapın.
   2. Beyincik ve görsel korteks arasındaki bağlantıdan, ventral ve talamosinkülat yoluna paralel olan ön komissür ve optik yol arasındaki orta noktaya kadar ikinci çapraz kesimi yapın.
   3. Beyin bloğunu siyanoakrilat yapıştırıcı ile köşeli bir plakaya (~ 120 °) takın ve yolun dönüş noktasının hemen üzerinde bir kesim yapın. Plakayı açın, düzleştirin ve bir vibratomun hazne aşamasına yapıştırın.
   4. Medial talamus-ACC beyin dilimleri (500 μm kalınlığında) yapın ve ardından bunları buz gibi soğuk oksijenli aCSF'ye batırın. Dilimleri kayıt odasına aktarın ve 1 saat boyunca oksijenli aCSF ile sürekli perfüzyon (12 ml / dak) altında 32 ° C'de tutun.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Anestezi:
İzofluran	Halokarbon Ürünleri Şirketi	NDC 12164-002-25	%4
aCSF (toplam: 1L):
D (+) - Glikoz	Merck	1.08337.1000	10 milyon
Sodyum hidrojen karbonat	Merck	1.06329.0500	25 milyon
Sodyum klorür	Merck	1.06404.1000	124 milyon
(+) - Sodyum L-askorbat, >=% 98	Sigma	A4034-100G	0.15 g / 2 cc
Magnezyum sülfat, susuz, ReagentPlus	Sigma	M7506-500G	2 milyon
Kalsiyum klorür dihidrat	Merck	1.02382.1000	2 milyon
Sodyum dihidrojen fosfat monohidrat	Merck	1.06346.1000	1 milyon
Potasyum klorür	May & Baker Ltd Dagenham İngiltere	HANIM 7616	4,4 milyon