$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Hayvan anestezisi ve cerrahisi
- Yerel hayvan bakım komitenizden onayladığınız anestezi rejimi ile fareyi tartın ve uyuşturun.
- Ameliyattan önce derin anesteziyi doğrulamak için forseps ile kuyruk veya ayak parmağınızı çimdikleyin.
- Fareyi stereotaksik bir aparata yerleştirin ve kafasını sabitleyin.
- Nemli kalmaları için her iki gözünüze de göz merhemi sürün. Ameliyat öncesi ve sonrası analjezi ile ilgili yerel hayvan bakımı yönergelerinizi izleyin.
- Cerrahi makas kullanarak saçları tıraş edin. Açıkta kalan cerrahi alanın ortasına makasla küçük bir kesi (12-15 mm) yapın. Forseps kullanarak, kafa derisini nazikçe orta hattan uzaklaştırın.
- Cildi nazikçe ayırın ve kalan dokuyu çıkarın. Hidrojen peroksit kaplı pamuklu çubuklar kullanarak kafatasını temizleyin.
- Kayıt mikroelektrotlarının stereomikroskop altında M2 bölgelerine yerleştirilmesine izin vermek için kafatasının sol ve sağ tarafında 1.0-1.5 mm yarıçaplı iki küçük delik açın (Şekil 1A).
not: Bilateral M2'nin stereotaksik yerleşimleri: Bregmanın 1.94 mm önünde, orta hatta 1.0 mm lateral ve duraya 0.8-1.1 mm ventral .
- Dura mater'i bir tungsten iğnesi ile dikkatlice çıkarın.
- Cam borosilikat mikropipetleri (dış çap: 1.0 mm) 1-2 MΩ dirençli kayıt mikroelektrotları olarak çekin.
- Mekanik mikromanipülatörler kullanarak deliklere 0,5 M NaCl ile doldurulmuş iki ayrı kayıt mikroelektrodu yerleştirin (60°'de, Şekil 1B).
2. Farelerin bilateral M2'sinde LFP kayıtları
- Sol ve sağ cam elektrotları yavaşça bilateral M2'nin uygun koordinatlarına indirin (Şekil 1C).
- Kalite kontrol için, LFP'leri yakalamadan önce diferansiyel amplifikatörü kullanarak her elektrotun direncini test edin.
- Kayıt işlemini 0.1x amplifikasyon ile 1,000 Hz yüksek geçiş ve 1,000 Hz düşük geçiş olarak ayarlayın.
- Fareler anestezi altında saniyede 2 nefes solunum hızında eşit şekilde nefes alırken, stabil bir durumda en az 60 s spontan aktivitenin sayısallaştırılmış ham LFP verilerini toplayın.
- Kayıttan sonra, elektrotları beyinden yavaşça kaldırın, ardından fareleri hızlı servikal çıkık ile ötenazi yapın.
- Verileri kaydedin ve çevrimdışı olarak analiz edin.
