Nöronal Hücrelerden Protein Ekstraksiyonu

Özet

Kaynak: Shani, T., et al. Motor Nöron Benzeri NSC-34 Hücreleri İçinde Gerçek Zamanlı Nükleositoplazmik Taşımayı Ölçmek için Deney. J. Vis. Uzm. (2017)

Bu protokol, nöronal kanser hücrelerinden proteinlerin ekstraksiyonunu ana hatlarıyla belirtir. Hücreler bir tampon ile yıkanır ve enzimatik ve mekanik bozulma yoluyla parçalanır. Ekstrakte edilen protein açısından zengin süpernatant, santrifüjlemeden sonra toplanır.

Protokol

1. Hücre Hattı Hazırlığı

1. Sıvı bir nitrojen kabında saklanan yaklaşık 1.000.000 fare nöroblastom omurilik hücresini (NSC-34 hücreleri) çözün. Hücreler tamamen çözülene kadar 37 °C'lik bir su inkübatörü kullanın.
2. Taze, ılık ortam ekleyin (% 10 fetal sığır serumu (FBS),% 1 L-glutamin ve% 1 pen-strep antibiyotik içeren DMEM ortamı).
3. Çözülmüş hücreleri (SL16R) 500 x g'da 5 dakika boyunca santrifüjleyin ve bir hücre peleti oluşturun. Ortamı atın ve hücre yeniden süspansiyonu için 1 mL yeni ortam ekleyin.
4. Yeniden süspanse edilmiş hücreleri 15 mL'lik bir şişeye yerleştirin ve fazladan 5 mL ortam ekleyin. Hücreleri gece boyunca 37 ° C'....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Fare Motor Nöron Benzeri Hibrit Hücre Hattı (NSC-34)	tebu-biyografi	CLU140-A
DMEM 4.5g/L L-glikoz	Biyolojik Endüstriler	01-055-1A
FBS Avrupa Sınıfı	Biyolojik Endüstriler	04-007-1A
SL 16R Santrifüj	Termo Bilimsel	75004030
Thermo Forma Serisi ii Su Ceketli CO2 İnkübatörü	Termo Bilimsel	3111
Kapak camı 12mm çap.kalınlık 0.13-0.17mm	Bar Naor Ltd
Axiovert 100 ters mikroskop	Zeiss
Leptomisin B	Sigma	L2913
Pbs	Biyolojik Endüstriler	02-023-1A
Homojenizatör motoru/kontrol/mandren/90 derece kelepçe	Glas-Col	099C K5424CE
MicroCL 17R Santrifüj, Soğutmalı	Termo Bilimsel	75002455

Serisi Serisi