$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
>1. Hayvanlar
- Bu çalışmada 3 aylık erkek ve dişi sıçanlar kullanın.
- Hayvanları yiyecek ve suya ücretsiz erişim ile 12 saatlik bir aydınlık/karanlık döngüsünde tutun.
2. Hayvan Anestezisi için KAX (Ketamin + Ksilazin + Asepromazin) Kokteylinin Hazırlanması
- 50 mg ksilazini (20 mg / ml) 5 ml ketamin (100 mg / ml) içinde 1 ml asepromazin (10 mg / ml) ve 3 ml damıtılmış su ile çözün. İyice karıştırın.
- Bir şırınga filtresi ile sterilize edin ve bu çözeltiyi 10 ml'lik bir serum şişesinde saklayın.
3. KAX Enjeksiyonu
- Hayvanı (g) tartın ve enjeksiyona hazır olana kadar kafese geri dönün.
- 28 G iğne ile 1 ml insülin şırıngası kullanarak intraperitoneal olarak 0.1 ml KAX / 100 g hayvan vücut ağırlığı enjekte edin.
- Hayvanın bilinçsiz hale gelmesine izin verin. Ayakları ve kuyruğu sıkıştırarak refleksleri kontrol edin.
- Ameliyat süresince tüm hayvanları güvenli bir şekilde laboratuvarda tutun.
- Ameliyat sonrası, hayvanları kafeslerine yerleştirin ve bilinç geri kazanılana kadar oda sıcaklığında (RT) rahat tutun. Hayvanları yalnızca hayvanlar uyandığında ve normal davranışlarına devam ettiklerinde hayvan tesisine geri getirin.
4. Ameliyat ve Mikroiğne Montajı için Hazırlık
- Steril bir 2 M NaCl çözeltisi yapın.
- Bir adet 0.86 mm iç çaplı, ağır cilalı standart ve ince duvarlı borosilikat tüpü iki ince konik cam mikro iğneye çekmek için bir mikroelektrot çektirme (Şekil 1C) kullanın (Şekil 1D, Şekil 1E).
- Bir geri doldurma şırınga iğnesi ve 1 ml'lik bir şırınga kullanarak önceki adımdan bir mikroiğneyi 2 M salin ile doldurun (Şekil 1B). Elektrotun ucundaki hava kabarcıklarını hafifçe vurun.
- İkinci bir 1 ml şırıngayı 2 M NaCl ile doldurun. 18 G'lik bir iğne bağlayın ve ardından bir uzunlukta (yaklaşık 10 inç) polietilen boru takın (Şekil 1A). Polietilen boruyu iğneden tuzlu su ile doldurmak için şırınga pistonunu kullanın.
- Hem mikroiğne hem de hortum tuzlu su ile doldurulduğunda, ikisini dikkatlice bağlayın. Aralarındaki bağlantıdaki havayı ortadan kaldırın (Şekil 2).
- Mikro iğnenin ucunu, bir kurs kağıdı havlunun damarına çok hafif bir şekilde kazıyarak ince bir şekilde eğim verin.
- Kağıt havlu üzerinde ince bir sıvı akışı görülene kadar şırınga üzerindeki pistonu hafifçe iterek mikroiğnenin direncini kontrol edin. Sıvı akışı 0,5 mm'den daha geniş olmamalıdır.
5. Hayvanın Hazırlanması
- Korneaya 1-2 damla topikal anestezik uygulayın (Proparakain Hidroklorür Oftalmik Solüsyon, USP,% 0.5). Oküler refleks oluşmayana kadar bekleyin.
- Bıyıkları makasla kesin.
- Pamuk uçlu bir aplikatörü betadin solüsyonu ile doyurun ve deneysel gözün etrafındaki alanı temizleyin.
- Bir mikroskop kullanarak, gözü şişirmek, episkleral veni ortaya çıkarmak ve göz hareketini kısıtlamak için alt göz kapağını kelepçelemek için bir hemostat takın. (Şekil 3, ok ucu)
6. Glokoma Neden Olan Salin Enjeksiyonu
- Mikroiğne düzeneği ve hayvan hazırlandığında enjeksiyonlara başlayın.
- Hayvanın ayaklara/kuyruk tutamına yanıt vermediği onaylandığında, damara 10 ila 20 derece arasında düşük bir açıyla gelerek episkleral damarı mikroiğne ile dikkatlice delin (Şekil 3, beyaz ok). Damar içine başarılı bir delinme, kan mikroiğnenin ucuna girdiğinde belirgindir (Şekil 3, siyah ok).
- Damar içine yavaşça ve manuel olarak yaklaşık 50 μl salin enjekte edin. Bu işlem yaklaşık 10 saniye sürmelidir. Tuz damar sistemi boyunca dolaşırken damarlar beyazlaşacaktır (Şekil 4, ok ucu). Bazı bölgeler kan kırmızısı görünümünü koruyabilir (Şekil 4, ok).
- Tam retinal ganglion hücre tabakasında tam retina hasarı sağlamak için damar içine, birincinin bulunduğu yerin tersine ikinci bir enjeksiyon yapın.
Not: Birkaç dakika içinde, tuz vasküler sistemde dolaşırken gözün irisi boyunca belirgin bir bulanık görünüm görülmelidir.
- İç kontrol olarak kullanmak için karşı gözü tedavi edilmeden bırakın.
