Method Article

İmmünofloresan Kullanarak Fare Beynindeki Bir Presinaptik Proteinin Dağılımının Ölçülmesi

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Wallrafen, R., et al. İmmünofloresan Kullanarak Fare Beynindeki Sinaptik Bir Proteinin Heterojen Dağılımının Ölçülmesi. J. Vis. Exp. (2019).

Bu video, belirli bir presinaptik proteinin dağılımını ölçmek için bir fare beyin diliminin immünofloresan boyamasını göstermektedir. İşlem, spesifik olmayan bölgelerin bloke edilmesini, hedef protein için birincil antikorların ve bir referans işaretleyicinin uygulanmasını, ardından ikincil antikor etiketlemesini ve nükleer karşı boyamayı içerir. Referans işaretleyici, tutarlı bir taban çizgisi sağlayarak doğru niceleme sağlar ve presinaptik proteinin dağılımı, konfokal mikroskopi kullanılarak beyin bölgeleri arasında analiz edilir.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hayvan örneklerini içeren tüm prosedürler, uygun hayvan etik inceleme komitesi tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır.

1. İmmünofloresan

  1. Bloke edici tampon, antikor tamponu, yıkama tamponu 1 ve yıkama tamponu 2 dahil olmak üzere çözeltileri hazırlayın (bkz. Tablo 1).
  2. Fazla optimum kesme sıcaklığı (OCT) bileşiğini çıkarmak için dilimleri fosfat tamponu (PB) ile bir kez durulayın.
    1. Solüsyonu beyin dilimlerini emmeden plastik bir pipetle çıkarın. 1000 μL'lik bir pipetle 250 μL taze PB ekleyin.
      Dikkat: Dilimler kurumamalıdır, bu nedenle sıvıları i....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
1.5 mL reaksiyon tüpleriEppendorf Belediyesi30120094
50 mL reaksiyon tüpleriGreiner Bio-Bir227261
Multiwell 24 kuyuBalıkçı Bilimsel087721H
Plastik Pipet (Tek Kullanımlık)Sarstedt8,61,176
1000 mL pipetYağmur17014382
2 ml pipetEppendorf Belediyesi3123000012
Girdap Dehası 3İKA3340001
Menzel mikroskop slaytlarıBalıkçı Bilimsel10144633CF
StereoskopLeica Belediyesi
LSM800ZeissKonfokal mikroskop
PBS (10X)Roche11666789001
Doku TekSakura Dili4583Ekim
Na2HPO4BiyoFroxx5155KG001
NaH2PO4Merck1,06,34,60,500
normal keçi serumuMerck KırlangıçS26-100ML
normal eşek serumuMerckS30-100ML
Triton X-100Merck1,08,60,31,000
tavşan anti-Hareket EttiriciSinaptik SistemlerRRID: AB_10804285
kobay anti-SinaptofizinSinaptik SistemlerRRID: AB_1210382
eşek anti-tavşan AF647Jackson İmmün AraştırmaRRID: AB_2492288
keçi anti-fare AF488Jackson İmmün AraştırmaRRID: AB_2337438
Mowiol4-88Calbiochem (Kireç Biyokimyası475904
ZEN2 blue yazılımıZeissMikroskopi yazılımı
FijiResimJAnaliz yazılımı
Microsoft ExcelMicrosoft Bilişim Sistemleri
Belediyesi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi ) Teknolojisi

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Presynaptic ProteinImmunofluorescence StainingMouse BrainConfocal MicroscopyFluorescence IntensityPrimary AntibodiesSecondary AntibodiesNuclear CounterstainingBrain Slice PreparationImage Analysis Fiji

Related Articles