$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Kraniektomi ve kontrollü kortikal etki
- Kontrollü kortikal darbe cihazının ve cerrahi malzemelerin hazırlanması.
- Yara irrigasyonu için 0,5 mL steril salin içeren 1 mL kayar uçlu bir şırınga yükleyin. Sulamayı kontrol etmek için şırıngaya 25 G'lik bir iğne takın.
- Dimetil sülfoksit (DMSO) içinde 1 mg / mL'lik bir nihai konsantrasyona kadar seyreltik bir siklosporin A (CsA) çözeltisi hazırlayın. İmmünosupresyon için 0.5 mL CsA çözeltisi ile ikinci bir 1 mL kayma uçlu şırınga yükleyin. CsA şırıngasına 25 G veya daha büyük bir iğne takın.
- Kontrollü kortikal darbe pistonunu stereotaksik bir çerçeve üzerindeki bir kola takın ve 15 ° 'lik bir açıya ayarlayın. Pistona 3 mm'lik bir çarpma probu takın.
- Hafif bir kortikal yaralanma oluşturmak için çarpma hızını 1,5 m/s'ye ve çarpma bekleme süresini 0,1 s'ye ayarlayın.
- Tek taraflı kraniektomi yapın
- Fareyi, sıkıştırılmış bir oksijen kaynağına sahip bir izofluran buharlaştırıcıya bağlı bir anestezi indüksiyon odasına yerleştirin. ~ 0.7 L / dak oksijende ~% 3 izofluran ile anesteziyi indükleyin. Ayak parmağı tutamına yanıt verilmemesi nedeniyle anestezi derinliğini kontrol edin.
- Elektrikli makas kullanarak kafa derisini tıraş edin ve gevşek tüyleri silin.
- Fareyi, ekli bir anestezik dağıtım burun konisi ile stereotaksik bir çerçeveye yerleştirin.
- Anestezi altında vücut ısısını korumak için farenin altındaki stereotaksik çerçeveye 37 °C'lik bir ısıtma pedi yerleştirin. Kafayı kulak çubukları ve bir ısırma çubuğu ile yerine sabitleyin ve kafasını kafatasının ön kemiği yatay olacak şekilde yönlendirin. Ameliyat süresince anesteziyi ~% 1.5 -% 2 izofluranda tutun.
- Ameliyat öncesi bakım ve aseptik cerrahi hazırlık yapmak için steril bir pamuklu çubuk kullanarak gözlere antibiyotik oftalmik merhem sürün. Traş edilmiş saç derisi bölgesine iyot bazlı bir solüsyon uygulayın. Bunu %70 etanol ile çıkarın. Hayvanı, başın üst kısmı görünecek, ancak gözler kapalı olacak şekilde fenestre bir cerrahi örtü ile örtün.
- Bir neşter veya makas kullanarak kafa derisinde orta hat kesisi (1.5-2 cm) yapın. Yarayı temizlemek ve bregmada orta hattın solundaki fasyayı temizlemek için steril pamuklu çubuklar kullanın.
- Kraniektomi bölgesini belirlemek için çarpma probunu kullanın.
- Stereotaksik referans noktasını (X = 0, Y = 0) bregma olarak ayarlayın. Probu yanal olarak orta hattın 2 mm soluna ayarlayın. İnce uçlu, cerrahi olarak güvenli bir işaretleyici kullanarak probun etrafında 5 mm çapında bir daire çizin. Çarpma tertibatını kaldırın ve konumundan döndürün.
- ~%70 - %80 maksimum hızda yuvarlak uçlu 0,6 mm veya 0,8 mm çapak matkap ucu kullanarak kafatasında açık bir delik açmak için yüksek hızlı döner mikromotor kiti el aletini kullanın. Bu kenarlığı inceltmek için 5 mm'lik çevresel anahat boyunca delme sırasında kafatasına hafif basınç uygulayın.
- Delme sırasında aşırı basınç uygulamayın. Titreşim, kompresyon veya kazara penetrasyon kortikal yaralanmaya neden olabilir. Bunun yerine, matkap ucunun hızının işi yapmasına izin verin.
- Kafatasının aşırı sürtünme ısınmasını önlemek için herhangi bir noktayı çok uzun süre delmeyin. Kalıntıları temizlemek ve döner aletin ısınmasını azaltmak için kraniektomiyi ara sıra steril tuzlu su ile sulayın.
- Koronal sütür hattını delerken çok dikkatli olun, çünkü bu noktalar kanamaya karşı savunmasızdır.
- Kraniektomi taslağı yeterince inceldiğinde kafatası flebini çıkarmak için bir çift ince cımbız kullanın. Flebi medial olarak kavrayın ve radyal bir hareketle yavaşça yanal olarak kaldırın ve çekin.
- Flebi kaldırırken dura mater'e zarar vermeyin; bu ciddi yaralanmalara ve kanamaya neden olabilir.
- Hafif kontrollü bir kortikal darbe yaralanması gerçekleştirin
- Çarpma probunu steril bir alkol hazırlama pedi ile temizleyin. Çarpma probunu açıkta kalan korteks üzerindeki konumuna geri getirin. Probu dura mater yüzeyine değene kadar indirin. Bu konumu Z = 0 olarak işaretleyin.
- Pistonu geri çekin ve Z = -1.0 mm'ye getirin. Kortekse çarpmak için pistonu boşaltın.