Bir Sıçan Modelinde Aktif HIV Enfeksiyonu Oluşturulması

Özet

Kaynak: Li, H., McLaurin, et al. EcoHIV Beyin Enfeksiyonunun Bir Sıçan Modeli. J. Vis. Uzm. (2021).

Bu video, deneysel modelde aktif bir HIV enfeksiyonu oluşturmak için virüs RNA'sının konakçı genomuna entegre olduğu, çoğaldığı ve yayıldığı bir farenin beyninin korteksine kimerik HIV virüslerinin enjekte edilmesi prosedürünü göstermektedir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. EcoHIV-EGFP [Ekotropik HIV Geliştirilmiş Yeşil Floresan Protein] virüsü stereotaksik ameliyatlar

1. % 3 sevofluran kullanarak sıçanları uyuşturun. Sıçanlar zararlı uyaranlara cevap vermediğinde ve refleksleri olmadığında, adım 1.2'ye geçin.
2. Beyin bölgesindeki kılları tıraş edin ve cildi% 70 etanol ve klorheksidin bazlı bir ovma ile iki kez sterilize edin. Fareyi stereotaksik aparatta yüzüstü pozisyonda sabitleyin.
3. Kafa derisi orta hattı boyunca deriden bir kesi (5-6 cm) yapın.
4. 0,8 mm yanal, 1,2 mm rostral ila bregma'da iki delme konumunu işaretleyin. Her kafatası pozisyonunda bir delik (çap 0,4 mm) açın.
5. Titre edilmiş EcoHIV lentivirüs çözeltisini (1.04 × 10⁶ TU / mL) 10 μL'lik bir enjeksiyon şırıngasına doldurun. Şırıngayı stereotaksik cihaza sabitleyin.
6. İğneyi delme deliğinin yüzeyine yakın bir yere doğru hareket ettirin. 2,5 mm derinlikte ölçün ve hareket ettirin.
7. 1 μL virüs solüsyonunu 0.2 μL / dk oranında infüze edin. İğneyi enjeksiyon alanının içinde 5 dakika tutun. İğneyi, sıçan kafatasının dışına çıkana kadar yavaşça yukarı doğru hareket ettirin.
8. Cildi 4-0 ipek iplikle dikin.
9. Kesiği bir kez% 70 etanol ile sterilize edin. Deri altına butorphanol (Dorolex, 0.1 mg / kg vücut ağırlığı) enjekte edin.
10. Fareyi uyanana kadar bir ısıtma yastığı ile bir kurtarma odasına aktarın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Antibiyotik-Antimikotik çözelti	Hücre Kanalı	30004CI	100 kat
Kapak camı	VWR (VWR)	637-137
alıştırma
Ethicon Vicryl Plus Antibakteriyel, 4-0 Poliglaktin 910 Sütür, 27 inç. FS-2	Med Vet International	VCP422H
Hamilton şırınga	Hamilton	1701
İris Forseps	Dünya Hassas Aletler	15914
İris Makası	Dünya Hassas Aletler	500216
Stereotaksik cihaz	Kopf Aletleri	Model 900
Vannas Makas	Dünya Hassas Aletler	500086

Serisi Adet