Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Ponsta enfarktüs oluşumu
- Anesteziden hemen önce ısıtma yastığını önceden ısıtın.
- Kafatası matkabını stereotaksik çerçeve üzerindeki tutucuya takın.
- Sıçanlara intraperitoneal olarak 50 mg / kg ketamin ve 5 mg / kg ksilazin enjekte edin. Ayak parmağını kıstırma tepkisi olup olmadığını kontrol edin.
- Fareyi yüzüstü pozisyonda stereotaksik çerçeveye monte edin. Başı sabitlemek için kulak çubuklarını kulak kanalının üzerine yerleştirin. Enjeksiyonun herhangi bir şekilde eğrilmesini önlemek için kafatasının yatay tutulduğundan emin olun.
- Giriş ve çıkış portları olan sıçanlar için stereotaksik bir burun konisi ataşmanı yoluyla izofluran (% 100 oksijen,% 2.5 izofluran) ile anesteziyi koruyun. Sıcaklığı 37 °C'de tutmak için bir ısıtma yastığı kullanın ve prosedür boyunca izleyin.
- Kornea kurumasını önlemek için göz merhemi kullanın. Hafifçe ağrı tepkisi vermemek için pençeleri sıkıştırmak için forseps kullanın.
- Kafatasının kıllarını bir mikro tıraş makinesi ile tıraş edin. Dairesel olarak klorheksidin cerrahi fırçalamayı cerrahi insizyon bölgesinden başlayarak dışa doğru döndürerek uygulayın.
- Bilateral lateral kantus çizgisinden posterior bıngıldağın 0,5 cm arkasına kadar neşter ile 3 cm'lik bir orta hat kesisi yapın, bu bir cerrahi işaretleyici kalemin işaretlemesi gerekir.
- Kanı almak için pamuklu çubuk kullanın.
- Kafa derisini ortaya çıkarmak için cilt flebinin her iki tarafına bir parça cerrahi bant yerleştirilmelidir (Şekil 1).
- % 0.9 NaCl'ye batırılmış bir pamuklu çubukla bağ dokularını kafatası kemiğinden nazikçe çıkarın. Çıkarılmazsa, bağ dokuları matkaba takılacaktır.
- Bregmayı tanımlayın. Başlangıç noktası olarak bregmanın orta noktasını seçin ve ince uçlu siyah bir cerrahi keçeli kalem kullanarak işaretleyin.
- 6.0 mm AP, 2.0 mm ML'ye bir matkap yerleştirin (0.5–3.0 mm aralığında, Şekil 2A).
- Otomatik bir matkap kullanarak kraniyotomi (1 mm çapında) yapın. Dikkatli ilerleyin çünkü bu nokta venöz sinüse yakındır.
- Matkabı stereotaksik çerçeveden çıkarın.
- Stereotaksik çerçeveye yalıtımlı bir kılıf ile 22 G'lik bir prob yerleştirin (Şekil 3A). Prob ucu, kılıfın proksimal ucunun 2 mm yukarısına yerleştirilmelidir (Şekil 3A, B; Şekil 2B).
- Kılıfın beyne 7 mm girdiğinden emin olun (7 mm DV, Şekil 2B; Şekil 1C).
- Probu, probun ucu beyin yüzeyinin 9 mm altına gelene kadar kılıf boyunca ilerletin (Şekil 1D).
- Elektrotları bir elektrik stimülatörüne bağlayın (Şekil 3C). Anodu Şekil 1D'de gösterildiği gibi proba bağlayın. Katodu sıçanlara bağlayın (genellikle sıçanların kulağına).
- Elektrik stimülatörünü açın ve aşağıdaki parametreleri ayarlayın: tek darbe genişliği = 4.050 ms; voltaj = 50 V; ve akım = 4 mA (Şekil 3C). Elektrik stimülasyonu sırasında, sıçan titreme sergileyecektir. Bu çalışmada, davranış testleri, MRG ve TTC için kullanılan kontrol grubu sıçanları için cihaz açık değildi.
- Stimülasyondan sonra probu 5 dakika boyunca yerinde bırakın.
- Probu beyinden çıkarın (Şekil 1F).
- Kraniotomiyi örtmek için kemik çimentosu kullanın. Yara dikişinden önce çimentonun kurumasını bekleyin.
- Yarayı 4-0 poliamid sütür filamentleri ile dikin. Üç veya dört dikişten sonra 2-1-1 standart cerrahi düğüm atın.
- Enfeksiyonu önlemek için sıçanlara penisilin (0.25 mL, 4 mL salin içinde seyreltilmiş 80 IU) intraperitoneal olarak enjekte edin.
- Sıçanlara deri altından 2 mg / kg'lık bir dozda meloksikam enjekte edin ve ardından her 24 saatte bir tekrarlayın.
- Fareleri tamamen uyanana kadar her 15 dakikada bir izleyin ve bir ısıtma yastığı ile kafese geri koyun. Kurban kesilene kadar yiyecek ve suya ücretsiz erişim sağlayın.
not: Tüm prosedürler aseptik cerrahi prensipleri takip etmelidir. Ameliyattan önce, ellerinizi cerrahi olarak ovaladıktan sonra sert bir üst, cerrahi maske ve steril eldiven giyin. Steril dikiş malzemesini her zaman steril alan içinde bulundurun.
