$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Arteriyel kateterizasyon
- Fareyi intraperitoneal ketamin ve ksilazin enjeksiyonu ve yerel uygulamaya göre bir analjezik (ör., buprenorfin) ile uyuşturun. Doğru anestezi derinliğini doğrulamak için arka bacakları forseps ile sıkıştırın.
not: Bu çalışma için, 8-12 haftalık erkek C57BL / 6N fareleri kullanıldı (ağırlık 20-25 g). Yazarlar aynı yaştaki erkek BALB/c'yi başarısız bir şekilde test ettiler, ancak diğer suşları denemediler.
- Elektrikli bir tıraş bıçağı kullanarak ilgilenilen bölgelerdeki (baş, boyun) tüyleri alın. Yara kontaminasyonunu önlemek için gevşek saç kalmadığından emin olun. Daha sonra, cerrahi alanı% 70 etanol / klorheksidin / betadin ile dezenfekte edin ve fareyi başı cerraha bakacak şekilde sırtüstü yatırın.
- Diseksiyon makası ile servikal orta hat insizyonu yapın.
- Submandibular bezleri ve boyun kas dokusunu inceleyin ve ortak karotis arteri ortaya çıkarmak için ayırın. Forseps ile çoğunlukla künt diseksiyon kullanın.
- Üçüncü sıra: 8-0 Sağ ortak karotis arterin altındaki ipek ligatürler.
- Proksimal ligatür üzerine bir kelepçe yerleştirin ve akışın askıya alınması için artere gerginlik getirin.
- En distal ligatürü kapatın.
- Arteriyel kateteri, insizyonun kraniyal tarafındaki küçük, önceden oluşturulmuş bir cilt deliğinden yerleştirin. Kanın geri akışını azaltmak için çok büyük görünüyorsa, kateterin lümenini sıkın ve deforme edin. Her üç bitişik harfle de sabitleyin.
- Çıkığı önlemek için kateteri cilde sabitleyin. Bunu, kateteri önceden oluşturulmuş cilt deliği alanındaki cilde bağlayan bir sütür (örneğin, 5-0 monofilament, emilemez) kullanarak yapın.
2. Trakeostomi
- Pretrakeal kas sistemini forseps kullanarak künt bir şekilde inceleyin.
- İkinci sıra: 8-0 trakeanın altındaki ipek ligatürler.
- Tek taraflı ventilasyonu önlemek için mümkün olduğunca proksimal olarak mikro makas kullanarak trakeotomize edin. İki trakeal kıkırdak arasında yatay bir kesme çizgisi kullanın.
- Ventilasyon tüpünü yerleştirin ve hazırlanan her iki bitişik harfle sabitleyin.
not: Trakeanın proksimal ucunun bağlanmasına gerek yoktur.
- Cildi akan bir sütürle kapatın (örneğin, 6-0 monofilament, emilemez).
- Fareyi 150/dk frekans ve 200 μL tidal hacim ile havalandırın.
3. Beyin ölümü (BD) indüksiyonu
- Fareyi yüzüstü konuma getirin.
- Cildi tutmak için cerrahi makas ve forseps kullanarak cildi kafatasından çıkarın.
- Sol parietal korteksin üzerinde paramedial olarak 1 mm kalibreli bir sondaj deliği açın. İç kompakt kemiği ve dura mater'i kırmadan önce delmeyi durdurun.
- Keskin kenarları kaldırarak künt forseps kullanarak kafatasının son doku köprüsüne nüfuz edin.
- Balon kateteri tamamen kraniyal boşluk içinde olacak şekilde yerleştirin. Balonun tuzlu su ile önceden doldurulduğundan ve tüm havanın boşaltıldığından emin olun.
- Bir şırınga pompası yardımıyla 10-15 dakikalık bir süre boyunca (toplam hacim 0,8−1,2 mL) ~ 0,1 mL / dk'da şişirmeye başlayın.
not: Fare miyoklonus, midriyazis, daha fazla nöbet aktivitesi ve agonal nefesler sergileyecektir.
- Farenin kuyruğu sertleşip dikleştikten sonra farenin beyninin öldüğünü telaffuz edin.
not: Behçet, karakteristik bir başlangıç kan basıncı zirvesi (Cushing refleksi), beyin sapı reflekslerinin yokluğu ve spontan solunum ile doğrulanır. Deneyler sırasında düzenli apne testinden kaçınılmalıdır, çünkü fareler oksijen eksikliği nedeniyle dolaşım kararsız hale gelebilir.
- Balon kateterin şişirilmesini durdurun.
- Hipotermiyi önlemek için farenin üzerine bir ısıtma battaniyesi koyun.