$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Resiniferatoksin (RTX) Nöropatisinin Kurulması
>DİKKAT: RTX nörotoksik ve tehlikelidir. Temas halinde gözleri, mukoza zarlarını ve üst solunum yollarını tahriş eder. RTX hazırlığı sırasında solumaktan kaçının ve laboratuvar gözlüğü ve önlüğü kullanın. Ciltle teması halinde veya kullandıktan sonra bol su ile durulayın.
- Eşit hacimde Tween 80 ve mutlak etanol (her çözücü için 100 μL) içeren 200 μL'lik bir karışıma 1 mg RTX tozu ekleyin.
- RTX solüsyonunu (12 μL/flakon) ayırın ve -20 °C'de 3 aya kadar saklayın. Bu, RTX stokunu oluşturur; süresi dolduğunda kalan RTX çözümünü atın.
- RTX stoğunu normal tuzlu su ile 600 μL'lik nihai hacme kadar seyreltin. RTX çözeltisinin nihai konsantrasyonu %0,01 olmalıdır, bu da 10 μL araç çözeltisinde 1 μg RTX'e eşittir.
- Deney hayvanları olarak 8 haftalık yetişkin erkek ICR farelerini (35-40 g) kullanın ve farelere bir mikroenjeksiyon şırıngası ile intraperitoneal (i.p.) tek bir doz RTX solüsyonu (doz: sırasıyla 200, 50 ve 10 μg/kg) uygulayın. Fareler, derin anestezi için% 5 izofluran ile inhaler ile uyuşturuldu. Fareler RTX enjeksiyonu sırasında ekstremitelerin geri çekilme etkisi gösterdiyse, fareler anesteziyi daha uzun süre solumalıdır.
Örnek: Fare 40 g ağırlığındaysa, 50 μg/kg'lık dozu temsil eden 20 μL RTX çözeltisi alacaktır.
- Bir grup fareye kontrol olarak eşit hacimde araç verin (% 10 Tween 80 ve% 10 tuzlu su çözeltisinde mutlak etanol).
- RTX enjeksiyonundan sonra, fareleri 12 saat aydınlık/12 saat karanlık döngüde plastik bir kafese geri koyun ve yiyecek ve su ad libitum sağlayın.