Drosophila Sineklerinde Kapalı Kafa Travmatik Beyin Hasarı Uygulamak İçin Bir Teknik

Özet

Kaynak: Sun, M., et al. Drosophila'da Kronik Travmatik Ensefalopatiyi Modellemek İçin Yeni Bir Yöntem. J. Vis. Uzm. (2017).

Bu video, anestezi uygulanmış Drosophila sineklerinde gazla çalışan bir çarpma tertibatına sahip bir çarpma cihazı kullanarak kapalı kafa travmatik yaralanması meydana getirme prosedürünü göstermektedir. Yaralanma nöronal fonksiyonu etkiler ve yürüme yeteneğini bozar.

Protokol

1. Çarpma cihazının montajı (Şekil 1)

1. Pistonu 1 mL'lik bir tüberkülin şırıngasından çıkarın. Namluyu 1 mL işaretinde kesin.
2. 3 μL'lik bir pipet ucundan bir aerosol bariyerini (4 mm yükseklik x 200 mm çap) çıkarın ve çarpma tertibatı olarak kullanın. Çarpma tertibatını şırınga haznesinin içine yerleştirin. Çarpma tertibatını uç ucuna hareket ettirmek için namluya hafifçe vurun ve düz tarafı meme açıklığını kaplayın.
3. Namlu ucu ucunu bir Drosophila anestezi istasyonunun karbondioksit (CO₂) akış regülatörüne bağlı plastik boruya takın.
4. Namluyu dikey olarak tutun ve kelepçeleyin standart bir kelepçe tutucu standına yerleştirin, böylece çarpma tertibatı namlunun altında kalır.
5. Sinek tutucuyu yapmak için 200 μL'lik bir pipet ucunu değiştirin.
   1. 0,8 mm çapında bir açıklık oluşturmak için uçtan 4 mm kesin, böylece yalnızca sinek kafasının açığa çıkmasına izin verin.
      NOT: Göğüs kafesi ve sinek gövdesinin diğer tüm kısımları pipet ucunun içinde kalacaktır.
6. Konektörü yapmak için 1.000 μL'lik bir pipet ucunu ve 1 mL'lik bir şırınga iğnesi kapağını değiştirin.
   1. Ucun açıklığından 44 mm kesin. 1 mL'lik bir şırınga iğnesi kapağının 6 mm uzunluğunu alın ve 1.000 μL'lik pipet ucunun kalan bölümüne sıkıca itin.

2. Vuruş Cihazının Çalışması

Bir
1. sinek pedi üzerinde CO₂ kullanarak 2 günlük tek bir yetişkin dişi sineği uyuşturun.
2. İnce bir fırça kullanarak nazikçe sinek tutucuya aktarın. Sinek kafası uç ucunun dışında görünecek şekilde tutucuya hafifçe vurun. Sinek hortumu ucun dışına maruz kalırsa, körelmiş 1 mL şırınga iğnesi ile nazikçe ucun içine geri sokun.
   not: Sinek hortumunu tutucunun içinde tuttuğunuzdan emin olun. Aksi takdirde, sinek emme hortumu yaralanmasından ölebilir.
3. Sinek tutucuyu, sinek kafası aşağı bakacak şekilde konektörle şırınga namlusuna sıkın.
4. Gaz basıncını 100 kPa'ya ayarlayın. Akış hızını deney tasarımına göre ayarlayın.
5. Akış regülatörü geçiş anahtarını, çarpma tertibatının sinek kafasına bir kez çarpması için hızlı bir şekilde açıp kapatın.
6. Sinek tutucuyu kaldırın ve bir sineklik üzerinde hareket ettirin. Sinek tutucuyu ters çevirin ve sineğin dışarı çıkmasına izin vermek için hafifçe yana vurun. İyileşmesi için sineği boş bir şişede bırakın.

Sonuçlar

Şekil 1. Grev cihazının şeması. Cihaz, bir Drosophila laboratuvarında kolayca bulunabilen malzemeleri kullandı: 1) 200 μL pipet ucu, 2) 1 mL tüberkülin şırıngası, 3) çarpma tertibatı, 4) bir Drosophila anestezi istasyonuna bağlı bağlantı tüpü ve 5) ucu şırıngaya sıkmak için konektör.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Aerosol Bariyeri	ABD Bilimsel	1120-8810	Çarpma tertibatı olarak kullanılır
200 ul Pipet Ucu	ABD Bilimsel	1111-0706	Sinek başı tutucu olarak kullanılır
1000 ul Pipet Ucu	ABD Bilimsel	1122-1830	Bağlayıcı olarak kullanılır
1 ml Tüberkülin Şırınga	Becton Dickinson'ın fotoğrafı.	309625
60 mm Petri Kapları	Balıkçı Bilimsel	FB0875713A	İzleme arenaları olarak kullanılır
Akış Regülatörü	Genesee Bilimsel	59-122WC
Standart Kelepçe Tutucu / stand	EISCO Bilimsel	CH0688
İnce Fırça	Genesee Bilimsel	59-204
Flypad (Uçma Paneli)	Genesee Bilimsel	59-114

Serisi