Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Yenidoğan HI Beyin Hasarının Fare Modeli
- Yavruları izofluran ile uyuşturun.
- Yavruları (5'ten az) bir anestezi kutusuna koyun ve kapağı kapatın.
- Anestezi sistemini yaklaşık 15 dakika boyunca açın; masa üstü anestezi makinesi kullanarak gazı ve izofluranı ayarlayın. Oksijen akış ölçeri 1.5 L/dk'ya ayarlayın. Anestezi indüksiyonu için izofluran buharlaştırıcıyı% 3-5'e ayarlayın.
- 15 dakika sonra, anestezinin sürdürülmesi için izofluran buharlaştırıcıyı% 1-2'ye ayarlayın.
- Tamamen anestezi uygulanmış bir yavruyu diseksiyon mikroskobu altına (karın araştırmacıya bakacak şekilde) yatırın ve bantla sabitleyin.
- Sterilize makas kullanarak boyunda ~ 0,7 mm'lik bir kesi yapın.
- Sterilize edilmiş forseps kullanarak yağ dokusunu dikkatlice çıkarın ve tek taraflı sağ karotis arteri açığa çıkarın.
- Tek taraflı sağ karotis arteri 5-0 emilebilir sütür ile bağlayın.
- Boyundaki kesiyi 5-0 dikiş ile dikin.
- Her yavruyu iyileşme için 1 saat boyunca 37 ° C'lik ılık bir hipoksik odaya yerleştirin. Hazne kapağını kapatmayın.
- Ameliyattan 1 saat sonra, yavrular tamamen uyandığında, hipoksi odası kapağını kapatın ve hipoksik durumlar oluşturmak için gaz seviyelerini azaltın (% 8 O2 ve% 92 N2).
- 90 dakikalık hipoksiden sonra yavruları kafeslerine geri koyun.
- HI beyin hasarından bir hafta sonra, 1. adımı tekrarlayın.
- Anesteziden sonra, sağ hemisferin posterolateral bölgesindeki beyin lezyonunu tanımlamak için sterilize makas ve forseps ile kafa derisinde bir kesi yapın.
not: Bu tedavi yavrularda hipoksiye neden olur. Tüm farelerde beyin hasarının varlığı ve kapsamı, yarı saydam kafatası aracılığıyla çıplak gözle görsel olarak değerlendirilir. Renk değişikliğinin boyutu veya hacmi (yani beyin lezyonu) ile belirlendiği gibi, yavrular gruplara ayrılır. Görünür bir kortikal yaralanma yoksa, fare "kortikal yaralanma yok" grubuna sınıflandırılır. Görünür bir kortikal yaralanma varsa (yani, sağ hemisferde bir lezyon), fare "kortikal yaralanma" grubuna sınıflandırılır. Farelerin gruplara ayrılması operasyondan bir hafta sonra yapıldığından, kurban sırasında beyin örneklerinin morfolojileri net bir şekilde tanımlandığında gruplamalar değiştirilebilir.
