Merkezi Sinir Sistemi Enfeksiyonu Olan Bir Murin Modelinin Oluşturulması

Özet

Kaynak: Shen, T., et al. Dang Virüsünün Neden Olduğu Akut Viral Ensefalit Benzeri Hastalığın Murin Modeli. J. Vis. Uzm. (2019)

Bu video, CNS enfeksiyonu olan bir fare modelinin oluşturulmasını gösterir. Emziren bir yavruya virüs hem intrakraniyal hem de intraperitoneal olarak enjekte edilir. Virüs yayılır ve CNS'yi enfekte ederek nöronal hücre ölümüne ve iltihaplanmaya neden olur. Yavru, hastalık ilerledikçe enfeksiyon semptomları açısından değerlendirilir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Enfeksiyon Prosedürü

1. Uyarlanmamış DENV2 (suş PL046) stoklarını9 hazırlayın (orijinal olarak Tayvan'daki Hastalık Kontrol Merkezlerinden elde edilmiştir, 2,5 x 10⁷ ila 1 x 10⁹ PFU/mL arasında değişir).
2. Virüs stoğunu Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 orta ile toplam 40 μL hacme kadar 1 x 10⁶ PFU'ya seyreltin.
3. 30 G'lik bir iğne ile donatılmış bir 0.3 mL'lik şırıngayı 10 μL (2.5 x 10⁵ PFU) seyreltilmiş virüs ile doldurun ve 30 G'lik bir iğne ile donatılmış başka bir 0.3 mL şırıngayı 30 μL (7.5 x 10⁵ PFU) seyreltilmiş virüs ile doldurun.
4. 7 günlük ICR (Kanser Araştırmaları Enstitüsü) emziren fareyi tutun ve aşağıdaki adımları uygulayın.
   1. İntraserebral enjeksiyon için, işaret parmağı ile başparmak arasındaki kulak kepçesine bastırarak fareyi yüzüstü pozisyonda tutun ve intraserebral olarak 10 μL seyreltilmiş virüsü, sagital ve lambdoid sütürün kesişme noktası olan lambda bölgesine enjekte edin.
   2. İntraserebral enjeksiyondan sonra, işaret parmağını ve başparmağınızı kullanarak fareyi sırtüstü pozisyonda tutun ve 30 μL seyreltilmiş virüsü intraperitoneal olarak murin karnına nazikçe enjekte edin.
      not: Yamyamlığı önlemek için, annenin koku alma duyusunda geçici bir kayıp yaratmak için% 75 alkol kullanılır. Ek olarak, çöpü annelerinin dışkısı ve idrarı ile örtmesi önerilir.
5. Emziren fareleri kafeslerine geri koyun ve yürüme ve anne sütü emme de dahil olmak üzere farelerin hevesi ile güvenlik sonrası uyarımlarını kontrol etmek için 5 dakika bekleyin.
   not: Çoğu zaman, fareler stimülasyon sonrası normal aktivite gösterir ve teknik zorluğun ardından herhangi bir zararlı etki görülmemektedir.
6. Farelerin günlük ilerlemesini vücut ağırlığı (bir mikrogram dengesi kullanarak), akut viral ensefalit benzeri hastalık (bölüm 2'de tarif edildiği gibi hastalık skorlaması ile) ve sağkalım oranı açısından değerlendirin.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Roswell Park Memorial Enstitüsü 1640 orta (RPMI)	Gibco (Gibco)	11875-085	Virüsü seyreltme
0.3 mL İnsülin Şırıngası	BD Ultra-İnce II	328838	İntraserebral ve intraperitoneal enjeksiyon
Mikro terazi	METTLER TOLEDO'nun LabX'i	AL104	Ağırlık fare
Uyarlanmamış DENV2 (suş PL046)	Tayvan Hastalık Kontrol Merkezleri	-	Fareyi enfekte etmek
Kanser Araştırma Enstitüsü (ICR) emziren fare	BioLASCO Tayvan Co, Ltd	-	Murin modelimiz

Tezli Yüksek Lisans