$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Fare ayak pedi aşınması
- Bir C57BL / 6 fareyi (5-7 haftalık) izofluran gaz anestezik ile uyuşturun, küçük bir anestezi sistemi (oda) yoluyla% 3'lük bir dozda verin.
- Fareyi, aşılamadan önce, arka ayak pedine sırt üstü cerrahi anestezi düzlemine yerleştirin. Fareye diyaframlı bir burun konisi (hayvanın ağzına uyacak kadar büyük bir yarık) takın ve %1.5-2.0 arasında sabit bir dozajda izofluran gazı anestezik verin.
- Ayak parmağının forseps ile zorla sıkıştırılmasıyla oluşturulan ağrılı uyarana yanıt için fareyi yakından izleyin.
- Bir arka ayak tabanını düz forseps ile hafifçe kavrayın.
- Arka ayak tabanının tüysüz derisini, topuk ve yürüme pedleri arasında yaklaşık 20 kat, bir zımpara tahtası (100-180 kum) ile nazikçe aşındırın. Çok sık aşındırarak veya çok fazla baskı uygulayarak kanamaya neden olmayın.
- İnce forseps kullanarak, stratum base'yi ortaya çıkarmak için aşınmayla ayrılan stratum corneum'u yavaşça soyun.
2. PRV ayak tabanı aşılaması
- İstenilen titreye seyreltilmiş virüs aşısını% 2 fetal sığır serumu (FBS) ve% 1 penisilin / streptomisin içeren DMEM ortamında hazırlayın (Malzeme Tablosu).
- Viral dozu hesaplamak ve standardize etmek için PK15 hücreleri üzerindeki virüs stoğundaki plak oluşturan birimlerin (PFU) sayısını ölçün ve viral inokulumu buna göre seyreltin.
not: Bu çalışmada, virülan PRV suşu (PRVBecker) 8 x 106 PFU dozunda kullanıldı. Bu doz, aşılanmış tüm hayvanların aşılamadan 82 saat sonra (hpi) klinik semptomlar göstermesini sağlamak için önceki bir ön deneyde optimize edilmiştir.
- Virüs aşısını buz üzerinde tutun ve kullanmadan önce hafifçe karıştırın.
- Aşınmış ayak pedine 20 μL'lik bir virüs aşısı damlası (8 x 106 PFU) ekleyin (topikal uygulama). Sahte aşılamaları (yalnızca orta) paralel olarak gerçekleştirin.
- Virüsün adsorpsiyonunu kolaylaştırmak için bir iğnenin şaftı ile 10 kez hafifçe ovalayın. İğne ucuyla çizmekten kaçının. Bu adımı her 10 dakikada bir tekrarlayın.
- Aşınmış ayak tabanı kuruyana kadar fareyi 30 dakika anestezi altında tutun.
- Anesteziyi durdurduktan sonra, fareyi sternal yaslanmayı koruyana kadar izleyin ve klinik takip ve örnekleme için ayrı bir kafese yerleştirin.