Bir Fare Modelinde Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit İndüksiyonu

Abstract

Kaynak: Schmitz, K., et al. Farelerde Multipl Sklerozun EAE Modelinde Optik Nörit ve Beyin İltihabının Biyolüminesansı ve Yakın Kızılötesi Görüntülemesi. J. Vis. Deneyim (2017).

Bu videoda, deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) kullanılarak multipl sklerozun bir fare modeli oluşturulmuştur. Fareye, otoreaktif T hücrelerini aktive eden bir bağışıklık tepkisini tetikleyen bir nöronal peptit ve bir adjuvan içeren bir emülsiyon enjekte edilir. Bunu, otoreaktif T hücrelerinin beyne sızmasına izin vererek kan-beyin bariyeri geçirgenliğini artırmak için bir boğmaca toksini (PTX) enjeksiyonu takip eder. Bu infiltrasyon, multipl sklerozun demiyelinizan durumunu taklit ederek sonuçta miyelin hasarı ile sonuçlanan bir sinyal kaskadı başlatır.

Protocol

1. SJL/J Farelerde EAE İndüksiyonu

1. Fare
   1. 11 haftalık dişi SJL/J fareleri kullanın ve yaklaşık 7 gün boyunca deney odasına alışmalarına izin verin. Grup başına n = 10 fare kullanın.
   2. İlaç etkilerini değerlendirmek için, aşılamadan 3 veya 5 gün sonra başlayarak (grup başına n = 10) içme suyu veya gıda peletleri yoluyla kontrol grubu için ilacı ve plaseboyu sürekli olarak uygulayın. Hastalığın zirvesi sırasında, süt veya% 3 şekerli suya batırılmış mısır gevreği ile ilaç veya plasebo uygulayın.
2. Bağışıklama materyali
   1. Tam Freund adjuvanı (CFA, ısıyla öldürülmüş Mycobacterium tuberculosis H37 Ra) ve 2 flakon (her biri 5 μg) liyofilize boğmaca toksini (PTX) içeren bir emülsiyonda antijen (proteolipid proteininin peptidi, PLP139-151, 1 mg / mL emülsiyon) içeren bir EAE indüksiyon kiti kullanın.
   2. PTX'i (2 μg / mL) 1x fosfat tamponlu salin içinde çözün (PBS, yani her PTX tüpüne 1.5 mL PBS ekleyin, iyice karıştırın, aynı pipet ucuyla çıkarın ve 50 mL'lik bir tüpte 1 mL PBS'ye ekleyin); iyice karıştırın.
3. Bağışıklama
   1. PLP / CFA'yı, her ikisi de kuyruğun tabanında, her biri 100 μL olmak üzere 2 porsiyon halinde deri altına enjekte edin.
   2. Fare başına iki kez intraperitoneal olarak (IP) 100 μL PTX enjekte edin, ilki aşılamadan 1-2 saat sonra ve ikincisi 24 saatte.
   3. Kontrol fareleri için, PLP'siz CFA (2 porsiyon 100 μL) artı PLP'siz PTX enjekte edin.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
PLP139-151 / CFA emülsiyonu	Hooke Laboratuvarları, St Lawrence, MA	EK-0123	EAE indüksiyon kiti
Boğmaca Toksini	Hooke Laboratuvarları, St Lawrence, MA	EK-0123	EAE indüksiyon kiti
IVIS Lumina Spektrumu	Perkin Elmer, Inc., Waltham, Amerika Birleşik Devletleri		Biyolüminesans ve Kızılötesi Görüntüleme Sistemi
LivingImage 4.5 yazılımı	Perkin Elmer, Inc., Waltham, Amerika Birleşik Devletleri	CLS136334	IVIS analiz yazılımı
İzofluran	Abbott Laboratuvarları, Illinois, ABD	26675-46-7	Anestezi