Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Hayvan bakımı
- Bu deneyde 5 ila 6 haftalık erkek C57BL / 6J fareleri (20-25 g ağırlıkta) kullanın.
- Fareleri 12 saat / 12 saat aydınlık / karanlık döngüsünde tutun ve yiyecek ve su ad libitum aldıklarından emin olun. Çalışma boyunca hem sahte hem de TBI gruplarına aynı miktarda yiyecek ve su sağlayın.
- Hayvan acısını ve rahatsızlığını en aza indirmek için her türlü çabayı gösterin.
2. Travmatik beyin hasarının indüksiyonu
- Anestezi için Ketamin (80-100 mg / kg) / Ksilazin (10 mg / kg) IP enjekte edin. Bir göz refleksi veya ağrı refleksi kullanarak anestezi derinliğini test edin. Gözlerin kurumasını önlemek için suni gözyaşı veya kayganlaştırıcı göz merhemi kullanın.
- Anesteziden sonra fareyi yüzüstü pozisyona getirin. Ameliyat sırasında ve TBI'dan sonra 30 dakika boyunca sıcaklığı 37 ° C'de tutmak için sıcaklık kontrollü bir ısıtma yastığı kullanın.
- Kesi bölgesindeki saçları tıraş edin.
- Üç alternatif ovma kullanarak kafa derisini %70 etanol ile dezenfekte edin, ardından kafa derisini sagital bir düzlemde kesin.
- Her iki taraftaki kesiği geri çekmek için forseps kullanın ve periosteuumu hafifçe ayırın.
- Kafatasının sağ parietal bölgesine, orta hattan 2 mm uzakta bir daire (3 mm çapında) çizmek için bir işaretleyici kullanın.
- Kafatasını elektrikli matkapla delin. Duranın hasar görmesini önlemek için bu adımın dikkatli bir şekilde çalıştırıldığından emin olun.
- Kemik flebini çıkarın ve küçük bir kemik penceresini (3 mm çapında) ortaya çıkarın.
- Kraniotominin üzerine bir plastik yaralanma kanülü (iç çap = 2,5 mm, uzunluk = 8 mm) yerleştirin ve kanülü bir diş akrilik kullanarak kafatasına yapıştırın.
- Kanülde kabarcık olmadığından emin olmak için kanülü bir şırınga (5 mL) kullanarak steril% 0.9 NaCl (normal salin) ile doldurun.
- Osiloskopu ve amplifikatörü açın ve LFPI cihazının yüksek basınç tüpünde hava kabarcıkları olmadığından emin olun. Sabit bir sinyal verene kadar yaklaşık 10 darbe vererek cihazı test edin. Yaklaşık 2.0 atm'lik bir darbe yoğunluğuna ulaşmak için sarkaç başlangıç konumunun açısını ayarlayın.
- Yaralanma kanülünü LFPI cihazına bağlayın. Tetiği çekerek ve sarkacı serbest bırakarak beyin hasarına neden olun. Ardından, bir darbe alın ve bunu tüm kapalı sıvı dolu boru sistemi boyunca duraya iletin.
- Sahte gruptaki fareleri aynı cerrahi prosedürle ameliyat edin. LFPI'yi gerçekleştirmeyin.
