Bir Fare Modelinde Serebral Kavernöz Malformasyonların Cre-LoxP Aracılı İndüksiyonu

Özet

Kaynak: Choi, J. P., et al. Fare modelinde serebral kavernöz malformasyonların indüksiyonu ve mikro-BT görüntülemesi. J. Vis. Uzm. (2017)

Bu videoda, serebral kavernöz malformasyonları (CCM'ler) indüklemek için loxP bölgeleri ve bir östrojen reseptörüne kaynaşmış Cre rekombinaz ile çevrili Ccm2 genini taşıyan genetik olarak değiştirilmiş bir fare yavrusu kullanılmaktadır. 4-hidroksitamoksifen uygulaması, endotel hücrelerinde Cre'yi aktive ederek Ccm2'nin silinmesine ve beyinde CCM'lerin oluşumuna yol açar.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Fare Modellerinde Serebral Kavernöz Malformasyonların veya CCM'lerin İndüksiyonu

1. Çapraz Cdh5-CreErt2; Cdh5-CreErt2ile yavrular oluşturmak için Ccm2fl/fl ile Ccm5 fl/fl fareler; Ccm2fl/fl (Ccm2iECKO) yavruları ve littermat kontrolleri (Ccm2fl/fl). Cdh5-CreErt2 ve Ccm2fl/fl hayvanları daha önce tanımlanmıştır19.
2. 4HT'yi %100 etanol içinde çözün ve -80 ° C'de 30 μL 4-hidroksitamoksifen (4HT) (konsantrasyon: 10 mg / mL) alikotlarında saklayın. Kullanım gününde, aliquoted 4HT'yi mısır yağında (0.5 mg / mL) seyreltin.
3. Bir insülin şırıngası kullanarak deneysel CCM lezyonlarını indüklemek için P1'deki yenidoğan yavrularına intragastrik olarak 50 μL 4HT (0.5 mg / mL) enjekte edin.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
4-hidroksi tamoksifen	Sigma-Aldrich	H6278	Cdh5-CreErt2'yi etkinleştirmek için
Mısır yağı	Sigma-Aldrich	C8267-500ML	4-hidroksi tamoksifeni seyreltmek için
İnsülin şırıngası