$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
>1. Anesteziyi indükleyin
- Fareyi intraperitoneal olarak enjekte edilen ketamin (125 mg / kg) ve ksilazin (10 mg / kg) ile uyuşturun.
2. Her 15 dakikada bir yaşamsal belirtilerin izlenmesi
- Sıcaklığı, solunum hızını ve cilt rengini izleyin. Fare dokunulduğunda sıcak hissetmelidir. Cilt pembe görünmeli ve iyi perfüze edilmelidir. Solunum hızı dakikada 50-70 nefes arasında olmalıdır.
3. Cerrahi öncesi işlemler
- Yaralanma indüksiyonundan bir gün önce tüm fareleri tartın.
- Her deney deneği için otoklavlama yaparak bir set cerrahi aleti sterilize edin. Çarpma cihazını kullanmadan önce sterilize edin.
- "Düşük" ayara ayarlanmış ve fareler ayaktan kalktıktan sonra ısıdan uzaklaşabilecek şekilde yerleştirilmiş bir elektrikli ısıtma yastığının üzerine temiz bir kafes yerleştirerek bir kurtarma kafesi hazırlayın.
- Ameliyathaneyi sterilize edilmiş bir laminer akış başlığı içinde kurun.
- Stereotaksik çalışma çerçevesini konumlandırın.
- Çarpma cihazını stereotaksik çerçeveye takın.
- Çalıştırma cihazını hız ve bekleme süresi için istenen biyomekanik parametrelerle ayarlayın.
not: Bu protokolde, hızı 2,5 m/s ve bekleme süresi 0,1 sn olan 5 mm çapında bir kraniektomi yoluyla 3 mm çapında bir darbe ucu kullanılarak ciddi bir beyin hasarı tanımlanmıştır. TBH'nin tam spektrumunu indüklemek için çok çeşitli biyomekanik parametreler kullanılabilir.
- Yeni kişisel koruyucu ekipman ve steril eldiven giyin.
- Elektrikli makas kullanarak ameliyat bölgesindeki kürkü tıraş edin.
- Kornea yaralanmasını ve kurumasını önlemek için farenin gözlerine koruyucu oftalmik merhem sürün.
- Fareyi ameliyathaneye yerleştirin.
- Cildi üç kez alkolle dönüşümlü olarak iyot bazlı bir cerrahi ovma ile hazırlayın.
>4. Kontrollü kortikal etki uygulaması
- Kafatasını açığa çıkaran bir neşter ile kafa derisini orta hatta 1 cm kesin.
- İki taraflı temporal kemikleri minyatür kulak çubukları arasında sabitleyerek ve kesici dişleri bir kesici kelepçe içinde kilitleyerek fareyi stereotaksik bir çalışma çerçevesi içine yerleştirin ve fare kafası üzerinde sabit bir üç noktalı tutuş oluşturun.
- Kraniektomi sırasında kafa derisinin matkap ucuyla temas etmemesini sağlamak için kafa derisini bir hemostat veya kilitleme forseps ile ameliyat bölgesinden geri çekin.
- Açıkta kalan kafatasındaki sagital ve koronal sütürleri tanımlayın.
not: Bu protokol kraniektomiyi sagital sütürün 2 mm solunda ve rostral koronal sütürün 2 mm uzağında merkezler.
- Trephine matkap ucu olan bir matkap kullanarak bir kraniektomi yapın.
- Kraniektomiyi gerçekleştirmek için önce matkabı maksimum hızda etkinleştirin ve ardından trephine matkap ucunu kraniektomi bölgesinde kafatasına dik olarak uygulayın.
- Kafatası ile temas kurulduktan sonra matkaba nazik, eşit basınç uygulayın. Matkap kafatasından geçtiğinde hafif bir "verme" hissedilecektir. Altta yatan dura.
not: Bu protokol, kraniektomiyi gerçekleştirmek için 5 mm'lik bir trephine matkap ucu kullanır.
- Kemik flebini çıkarmak için forseps ve küçük bir ölçü hipodermik iğne kullanın ve alttaki dura materyali tamamen açığa çıkarın.
- Çarpma tertibatı ucunu çalışma alanına döndürün ve açıkta kalan dura mater ile temas edene kadar indirin. Temas kurulduktan sonra, cihazın temas sensörü, cerrahı temas yapıldığı konusunda uyarmak için sesli bir ton çıkaracaktır. Bu, deformasyon derinliğinin ayarlandığı sıfır noktasını işaretleyecektir.
not: Bu protokol, ciddi bir yaralanma oluşturmak için 3 mm'lik bir çarpma ucu kullanır. Daha lokalize yaralanma uygulamak için 1 mm kadar küçük uçlar kullanılabilir.
- Çarpma ucunu geri çekin ve stereotaksik çerçeve üzerindeki çarpma tertibatı konumunu düşürerek istenen darbe derinliğini ayarlayın.
not: Bu protokolde deformasyon derinliğini 2 mm'ye ayarlayarak ciddi bir yaralanmayı tarif ediyoruz.
- Çalıştırma cihazındaki çarpma tertibatını etkinleştirerek yaralanmayı uygulayın.
- Darbe cihazını alanın dışına döndürün ve hayvanı stereotaksik çerçeveden çıkarın.
5. Cerrahi alan kapatma
- Steril pamuk uçlu bir aplikatörden doğrudan basınç ile kafatasından ve yaralı kortikal yüzeyden kanamayı kontrol edin.
- Kafatasını steril pamuk uçlu bir aplikatör ile kurulayın.
- Piyasada bulunan bir cerrahi yapıştırıcı veya monofilament sütür kullanarak kafa derisini kraniektomi üzerine kapatın.
not: Bu protokolde saçlı deriyi kapatmak için veteriner cerrahi yapıştırıcı kullanılır. Kemik flebi değiştirilmez ve atılır.
>6. Ameliyat sonrası bakım ve izleme
- Ameliyat sonrası analjezi uygulayın (ör., 72 saat sürekli analjezi sağlayan deri altından uygulanan sürekli salımlı buprenorfin 0.1-0.5 mg / kg).
- Hayvanı önceden ısıtılmış temiz bir kafeste yanal dekübit kurtarma pozisyonuna yerleştirin.
- Hayvanları uyanık ve hareketli olana kadar gözlemleyin, ardından her fareyi ev kafesine geri koyun.
- Yiyecek ve suya ücretsiz erişim sağlayın. Normal yiyecek ve su alımı tipik olarak yaralanmadan sonraki bir ila iki saat içinde devam eder.
- Deney boyunca her üç günde bir vücut ağırlığını ölçün.