Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Torasik hemiseksiyon cerrahisi
- Ameliyat için aseptik bir ortam sağlamak için uygun koruyucu ekipman (eldiven, maske ve önlük) giyin. Cerrahi bölgeyi alkollü mendillerle temizleyin ve cerrahi alanın üzerine steril cerrahi örtüler yerleştirin. Cerrahi aletleri sterilize edin ve cerrahi alana yerleştirin.
- Sıçanı izofluran gazı (% 3 indüksiyon,% 0.5-3 bakım) ve oksijen (1 L / dak) karışımı altında uyuşturun. Ayak parmağı sıkışması ve kornea refleks yanıtlarının olmadığını doğrulayarak uygun cerrahi anestezik derinliğini onaylayın. Tüm prosedür boyunca fareyi sürekli olarak izleyin ve cerrahi anestezik derinliğini korumak için anestezik verme miktarını gerektiği gibi ayarlayın.
- Kalça ve boyun arasındaki sırt gövdesini tıraş edin, fareyi cerrahi alana yerleştirin, insizyon bölgesini alkollü mendiller ve proviodin solüsyonu ile dezenfekte edin ve rektal termometre tarafından izlenen geri besleme kontrollü bir ısıtma yastığı kullanarak çekirdek vücut sıcaklığını 37 ° C'de tutun.
- Gözleri nemli tutmak için üzerine oftalmik merhem sürün ve gerektiğinde ameliyat boyunca tekrar uygulayın.
- Deride 2,5 cm'lik bir kesi yapın ve T6−T10 omurlarını bir neşter ile kaplayın. Künt diseksiyon makası kullanarak cildi ve yüzeysel yağı geri çekin.
NOT: T6−T10 vertebral segmentleri, 2nd torasik omurun belirgin çıkıntısından başlayarak kafatasının tabanından dorsal omurga segmentlerinin nazikçe palpasyonu ile rostral olarak veya 13th torasik omurda harekete neden olacak en arka yüzen kaburganın palpasyonu ile kaudal olarak tanımlanabilir.
- Künt diseksiyon makası ve kendi kendini tutan bir ekartör kullanarak T7−T9 omurlarının dorsal yönüne yerleştirilen paravertebral kasları ayırın. Dikenli süreçleri ve vertebral laminaları ortaya çıkarmak için ince forseps ve pamuk uçlu aplikatörler kullanarak kalan dokuları debride edin ve temizleyin.
NOT: Bu ve sonraki adımlar, mikroskobik görselleştirme (~5−15x) tarafından büyük ölçüde desteklenir.
- Hassas kemik düzelticilerle T7 ve T8 omurları üzerindeki fasetleri (zigapoziyal eklemler) iki taraflı olarak dikkatlice kesin. T8 ve T9 vertebral laminaları arasındaki sırt bağ dokusunu yüzeysel olarak bir neşter (1 mm derinlikte) ile kesin ve alttaki kordona zarar vermemeye dikkat edin.
- T8 omurun dikenli sürecini kemik düzelticilerle çıkarın. T7 spinöz prosesine dikkatlice kenetlenmiş kavisli hemostatik forsepslerle, T8 laminaların kaudal ucunu hafifçe rostral olarak (~ 20 °) döndürün, kemik düzelticileri T8 laminasının altına yerleştirin ve lamina boyunca uzanan bir orta hat kesimi yapın. Omuriliği ortaya çıkarmak için vertebral lamina medialinin sol ve sağ tarafındaki kesileri transvers işlemlere tekrarlayarak laminektomiye devam edin.
NOT: Laminektomiden oluşturulan tüm kemik parçalarını çıkarmaya dikkat edin.
- Açıkta kalan omurilik kanalına lidokain (% 2, 0.1 mL) damlatın ve ince forseps ve iridektomi makası kullanarak T8 omurga segmentini kaplayan durayı çıkarın. Açıkta kalan kordona lidokain uygulamasını tekrarlayın ve açıkta kalan T7-T9 omuru arasında uzanan dikenli süreçler arasında oluşturulan bir merkez çizgisinin görselleştirilmesiyle kordonun orta hattını tanımlayın.
NOT: T7 ve T9'daki spinöz süreçlerin yanı sıra, T8'deki açıkta kalan dorsal kök gangliyonları da orta hattın tanımlanmasına yardımcı olmak için kullanılabilir. Sonraki hemiseksiyona yardımcı olmak için kordonun orta hattına 30 G'lik bir iğne yerleştirilebilir.
- Omuriliği orta hattan bir tarafa doğru bir diseksiyon bıçağıyla kesin. Ventral taraftaki ön omurilik arterini kesmemeye dikkat edin (omur gövdesine sıkı bir baskı uygulamayın). İridektomi makası kullanarak, ventrolateral kadranın uygun şekilde kesildiğinden emin olmak için omuriliğin lezyonlu tarafında kalan dokuyu dikkatlice kesin.
- Omuriliğin üzerindeki açıkta kalan boşluğa steril tuzlu suya batırılmış hemostatik sünger (~ 6 x 2 mm) yerleştirin ve kas katmanlarını dikin (4-0 poliglaktin 910). Ardından, kesi yerinin etrafındaki cildi dikin.
- Ameliyattan hemen sonra yeterli analjezik (buprenorfin 0.05 mg / kg subkutan [s.c.]), antibiyotik (enrofloksasin, 10 mg / kg sc) sağlayın ve kaybedilen sıvıları 5 cc laktasyonlu zil solüsyonu (intraperitoneal [i.p.]) ile doldurun.
- Fareyi anesteziden çıkarın. Hayvan tamamen uyanana kadar fareyi bir ısıtma yastığı veya lamba (~ 33 °C) altında ılık bir ortama yerleştirin.
- Ameliyattan sonraki ilk 3 gün boyunca günlük olarak ek analjezi sağlayın ve ağrı, kilo kaybı, uygunsuz işeme, enfeksiyon, yara iyileşmesi ile ilgili sorunlar veya otofaji belirtilerini sürekli olarak izleyin.
