Sıçan hipokampal bölümünde internöronların immün boyanması

Bu makalede

Özet

Swietek, B., ve diğerleri, Nörokimyasal Belirteçler için Biyositin Dolgulu ve İşlenmiş Bölümlerin İmmün Boyama. J. Vis. Uzm. (2016)

Bu video, bir sıçan hipokampal bölümünde biyositin dolu bir internöronun görselleştirilmesi sürecini göstermekte ve spesifik antikorlar ve floresan mikroskobu kullanılarak nörokimyasal kimliğini vurgulamaktadır.

Protokol

Hayvan örneklerini içeren tüm prosedürler, uygun hayvan etik inceleme komitesi tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır.

1. Primer antikor ve biyositin boyanması

(1. Gün)
NOT: Aşağıdaki immün boyama prosedürü serbest yüzen bölümler içindir ve tüm inkübasyon adımları için bir çalkalayıcı üzerinde düşük hızda (2 devir/dk, rpm) sürekli çalkalama gerektirir.

Dokuyu 3x, her biri 0.1 M PBS'de (pH = 7.4) 10 dakika boyunca yıkayın.
NOT: 0.1 M PBS ticari olarak satın alınabilir veya laboratuvarda aşağıdaki şekilde yapılabilir (1 L yapar): ....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

figure-results-1
Şekil 1. Biyosit dolguları için hücrelere yaklaşmak için önerilen düzlem. Görüntü, kayıt sırasında biyosit ile doldurulmuş ve biyositini ortaya çıkarmak için işlenmiş bir Granül Hücresini (GC) göstermektedir (594 konjuge streptavidin kullanılarak kırmızı renkte). GC, XY düzleminde yönlendirilmiş dendritlerine sahiptir. XY düzlemi boyunca pipet hareketi nedeniyle kopmuş granül hücre aksonuna (yeşil o.......