Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Hazırlıklar
- Entübasyon için 16 G periferik ven kateterini değiştirin. Değiştirmek için iğneyi 1 cm kısaltın ve kalan distali 1 cm 30° enjeksiyon valfine doğru bükün. Kateter kanatlarını çıkarın (çoklu kullanım).
- İntrakraniyal basınç veya ICP probu yapmak için, 20 mm'lik bir polietilen boru parçası kesin (iç çap (ID): 0.58 mm, dış çap (OD): 0.96 mm) ve açık bir lümen tutarak dairesel bir plaka yapmak için bir ucunu yakın. Polietilen borunun ucuna 1 mm silikon boru (ID: 1.0 mm, OD: 3.0 mm) bağlamadan önce polietilen boruyu 10 mm silikon boru (ID: 0.76 mm, OD: 2.4 mm) ile aşın.
- Dizüstü bilgisayarı açın ve veri toplama yazılımını açın. Kan basıncı (BP) ve intraserebral basınç (ICP) dönüştürücülerini ve Lazer-Doppler'i üreticinin talimatlarına göre kalibre edin.
- Kan gazı analizörü cihazını hazırlayın.
Dikkat: Buharlaştırıcıda yeterli izofluran olduğundan emin olun.
- O2'yi ve atmosferik hava akışını açın. O2 akışını %30'a ve atmosferik havayı %70'e ayarlayın.
- Isıtma yastığını yerleştirin ve sıcaklığı 37 °C'ye ayarlayın.
2. Anestezi
- Sıçanı,O2'nin% 30'u ve atmosferik havanın% 70'i ile anestezi odasına yerleştirin. İzofluran gazının% 5'ini odaya uygulayın. Yeterli anestezi yaklaşık 4 dakika sürecektir. Solunumu dikkatlice kontrol edin.
- Anestezi uygulandığında, fareyi bir lastik bantla sarılmış ağır bir plaka üzerine sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Farenin ön dişlerini lastik bandın altına yerleştirin.
- Dili kavisli forseps ile dikkatlice dışarı çekin. Gırtlağı pamuklu bir uçla temizleyin. Ses tellerini görselleştirmek için boğazın orta hattına harici bir ışık yerleştirin.
- Modifiye edilmiş 16 G periferik ven kateteri kullanarak inspirasyon sırasında entübe edin. Doğru şekilde yerleştirildiğinde stilettoyu çıkarın. Kateteri ventilatöre bağlayın.
not: Tüpün doğru yerleştirilmesi, solunum hızı ile senkronize göğüs hareketleri ile doğrulanır. Karın hareketleri görülürse, sıçanı ekstübe edin ve anestezi çanına yeniden yerleştirin. Hava yollarına zarar verme riski nedeniyle işlemi üç defadan fazla tekrarlamayın.
- Entübe edildiğinde, hayvanıO2'nin %30'u ve atmosferik havanın %70'i ile suni solunumda tutun. Anesteziyi izofluranın %1.5-3'ünde tutun. Kan basıncını 80-100 mmHg arasında tutmak için izofluranı ayarlayın.
- Solunum cihazının inspiratuar hacmini 3 mL'de ve frekansını 40-45 inspirasyon / dk'da tutun. İnspiratuar hacmi kan gazı analizine göre ayarlayın.
- 2-0 dikişle yanağın iç yumuşak dokusundan bir dikiş atın. Kateteri sabitlemek için dikişi enjeksiyon tüpünün etrafına ve periferik ven kateterinin enjeksiyon valfine bağlayın.
- Fareyi ameliyat alanına taşıyın ve kuyruğu cerraha bakacak şekilde sırtüstü pozisyona getirin.
- Kuru gözlere karşı koymak için gerektiğinde göz jeli uygulayın.
- Yeterli anestezi derinliğini doğrulamak için bir ayak parmağınızı sıkıştırın. Ameliyat sırasında anestezi derinliğini değerlendirin ve koruyun.
3. Kuyruk kateteri
- Kuyruğun proksimal 3-4 cm'sini% 0.5 klorheksidin etanol ile dezenfekte edin.
not: Şu andan itibaren, cerrahi mikroskobu cerrahın takdirine bağlı olarak kullanın.
- Ventral tarafta kuyruğun proksimal ucunda 15-20 mm'lik bir cilt kesisi yapın. Arteri kesmemeye dikkat edin.
- Kavisli bir forseps kullanarak cildi alttaki bağ dokusundan gevşetin.
- Arteri açığa çıkaran fasyaya dikkatlice nüfuz edin.
- Kavisli bir forseps kullanarak kuyruk arterini alttaki dokudan dikkatlice serbest bırakın.
- Kabın altına üç siyah ipek iplik kaydırın. Bir ipliği mümkün olduğunca distal olarak yerleştirin ve arterin etrafına sıkıca bir cerrahi düğüm bağlayın. İpliğin gevşek uçlarını bir kanama durdurucu ile tutun.
- Kalan iki ipliği arterin etrafına gevşek bir şekilde bağlayın.
- Proksimal ipliği mümkün olduğunca proksimal olarak itin. Proksimal ipliğin uçlarını tutmak için bir hemostat uygulayın. Kanama durdurucuyu hafifçe, ancak kan akışını kısıtlamak ve bloke etmek için yeterince çekin. Hemostatı karın üzerine yerleştirin.
- Kateterin ucunu 45° açıyla kesin. Arteriyel duvar penetrasyonunu önlemek için keskin noktayı kesin.
- Bir Vannas makası kullanarak, distal düğümden 3-5 mm uzakta, 30°'lik bir açıyla arter çapının 1/3'ü kadar bir arter kesisi yapın.
- Kateteri iki düz forseps kullanarak artere yerleştirin. Kateteri tutmak için bir forseps kullanın ve diğerini arteri kateterin üzerinden dikkatlice çekmek için kullanın.
- Kateteri damardan proksimal düğüme yerleştirin ve düğümü kanama durdurucudan gevşetin. Kateterdeki kan akışını görselleştirin. Orta ipliği katetere gevşek bir şekilde sabitleyin.
- Arterin tekrar fasya ile kaplandığı noktaya ve mümkünse hemen ötesine yerleştirmeye devam edin.
- Tuzlu su ile yıkayarak kateter yerleşimini ve olası sızıntıyı kontrol edin.
- Cerrahi düğümler kullanarak iki proksimal ipliği sabitleyin.
not: Kan basıncı ölçümünün pulsatil olması gerekir; Aksi takdirde, kateter uygun şekilde yerleştirilmemiştir.
- Distal ipliği kullanarak cerrahi bir düğüm atarak kesi sonunda kateteri sabitleyin.
- Cilt kesisini iki adet emilmeyen monofilament 4-0 sütür ile gevşek bir şekilde dikin. Katetere nüfuz etmemeye dikkat edin.
not: Ameliyat boyunca nabız genliğinin farkında olun. Bu düşükse, kateteri tuzlu suyla yıkayın.
- Kan gazı örneklemesi için kan akışına izin vermek üzere arteriyel kateteri basınç dönüştürücüsünden gevşetin. Kateterin ucuna bir mikrokılcal tüp yerleştirin. Kanın tüpe akmasına izin verin. Kan alındıktan sonra kateteri dönüştürücüye tekrar takın ve kateteri yıkayın.
- Kılcal boruyu kan gazı analizörüne yerleştirin. pH, pCO2 ve pH2'yi ölçün ve not edin
NOT: Kan gazı ve kan basıncı değerlerine bağlı olarak ventilasyon oranını değiştirin. Ortalama arteriyel basınç (MAP) çok düşükse, izofluranın akış hızını düşürmeye çalışın. Uygun anestezi derinliğini sağlamak için refleksleri test edin.
4. ICP probu
- Fareyi stereotaksik çerçeveye yerleştirin. Fareyi simetrik olarak konumlandırmak önemlidir.
- Boynun anterior fleksiyonunu oluşturmak için stereotaksik çerçevenin altına silindirik bir yastık yerleştirin.
- Farenin kafa derisini, boynunu ve kulakların arkasındaki alanı tıraş edin. Gereksiz saçları çıkarın.
- Alanı% 0.5 klorheksidin etanol ile dezenfekte edin.
- Adrenalinli 0.7 mL 10 mg / 5 μg / mL lidokain ile lokal olarak uyuşturun, iğneyi kafatasının orta hattaki kaudal ucuna yerleştirin. Boynun kas sistemine 0.3-0.4 mL ile enjekte edin. Geri kalanını deri altından bregmanın etrafına ve önüne enjekte edin.
- Orta hatta kaudal olarak ~ 8 mm iğne delinmesinden bir cilt kesisi yapın.
- Atlantooksipital membranı (orta hatta kafatasına kaudal olarak mermer renkli üçgen) tanımlamak için tüm kasları katmanlar halinde künt bir şekilde inceleyin.
- Boyun kaslarını dizginlemek için Alm ekartörünü kullanın. Gerekirse çatallı ekartörü kaudal olarak yerleştirin.
- Steril ICP probunun ICP dönüştürücüsüne bağlı olup olmadığını kontrol edin. ICP probunu tuzlu suyla yıkayın. ICP probunda hava kabarcığı olmadığından emin olun.
- 23 G'lik bir iğne kullanarak atlantooksipital zarı kesin. ICP probunu zardan geçirmek için bir delik açın.
- Probu atlantooksipital membrandan nazikçe koaksiyel hale getirin. Probu hafifçe çekin ve 0-5 mmHg arasında değişen bir titreşim eğrisi gösterdiğinden emin olun. Değilse, probu çıkarın, dönüştürücüye olan bağlantıyı kontrol edin ve lümenden geçen akışı onaylayın.
- İki damla doku tutkalı uygulayın. 1 mm'lik silikon hortumu membrana doğru ilerletin ve ICP probunun yer değiştirme riskini en aza indirmek için ek yapıştırıcı uygulayın.
- Ekartör(ler)i çıkarın.
- İnsizyonun sefalik ucuna bir yatay yatak sütürü ve emilmeyen bir monofilament 4-0 sütür kullanarak kaudal uca bir basit kesintili sütür yapın.
5. İğnenin ve Lazer-Doppler probunun yerleştirilmesi
- Orta hatta gözlerin hemen önünde, kaudal olarak 15 mm'lik bir kesi yapın.
- Bağ dokusunu ve kasları forseps ile çıkarın. Steril bir pamuklu çubuğun ucunu bir rougine olarak kullanın, bu da bregma ve koronal sütürlerin tanımlanmasını mümkün kılar.
- Alm ekartörünü yerleştirin.
- Stereotaksik çerçeveye 25 G'lik bir omurga iğnesi yerleştirin. İğneyi tam olarak bregma üzerine yerleştirin ve konumu not edin.
not: Stereotaksik çerçevenin orta hat eklemini dikey düzlemde hayvana doğru 30° açıyla yerleştirin.
- İğneyi bregmadan çıkarın, çerçeveyi 65 mm öne doğru hareket ettirin ve ardından delme bölgesini işaretlemek için iğneyi orta hatta yerleştirin.
- Dura mater kemiğin altında tanımlanana kadar delin. Düz forseps kullanarak kemik parçalarını nazikçe çıkarın ve boşluğu kemik mumu ile doldurun.
- Lazer-Doppler için bregmanın sağında ve koronal sütürün hemen önünde 3-4 mm yanal bir delik daha açın. Kemiğin tamamını delmek gerekli değildir. Dura materyaline nüfuz etmemeye dikkat edin.
- Lazer doppler'in kan akışını ölçebildiği damarları arayın. Lazer doppler'i yerleştirin ve değerleri kontrol edin. Minimum 100 FU değeri gereklidir. Mikroskobu çıkarın (yapay ışık).
- Değerler hala kabul edilebilirse, probu sabitlemek için bir damla yapıştırıcı ekleyin.
- Değerin 80 FU'nun üzerinde olup olmadığını doğrulamak için tekrar kontrol edin. Değer 80 FU'nun altındaysa, 80 FU.
'nin üzerinde bir değere ulaşmak için probu çıkarın ve yeniden konumlandırın
NOT: FU değeri, serebral kan akışını (CBF) gösteren rastgele bir birimdir.
6. Subaraknoid kanama (SAK) indüksiyonu
- Kafatasının tabanının direnci hissedilene kadar iğneyi yarım küreler arasındaki orta çizgide kafatasından nazikçe geçirin. Optik kiazmanın hemen önüne doğru yerleştirmeyi sağlamak için iğneyi 1 mm geri çekin.
- Kanı enjekte ederken en homojen sonucu elde etmek için iğneyi iğne ucu sağa bakacak şekilde saat yönünde 90° çevirin. Stiletto'yu çıkarın (Şekil 1).
- 15 dakika boyunca dengeleyin ve 80-100 mmHg aralığında ortalama bir arteriyel kan basıncı elde etmek için anestezi seviyesini ayarlayın.
- Kan gazı analizi yapın. Anestezi seviyesini buna göre ayarlayın.
- Künt 23 G iğne ile 1 mL'lik bir şırınga kullanarak kuyruk kateterinden 500 μL kan çekin.
- Hava enjeksiyonunu önlemek için spinal iğne odasının ölü alanını kanla doldurun. 23 G iğneyi kan dolu şırıngadan çıkarın ve şırınganın 300 μL kan içerdiğini onaylayın.
- Şırıngayı omurilik iğnesine bağlayın. Sıkıca kavrayın ve MAP'ı aşmak için kanı manuel olarak enjekte edin.
- Dizüstü bilgisayarda ICP'de dik bir artış ve CBF'de dik bir düşüş gözlemleyin.
not: Ameliyatın başarılı olması için CBF'nin en az 5 dakika boyunca başlangıç puanına kıyasla% 50 veya daha düşük olması gerekir, bkz. Şekil 2. Sahte sıçanlar 6.1-6.7 adımlarına tabi tutulmazlar, böylece omurga iğnesinin serebruma girmesini ihmal eder, olası spontan kanamayı ve iyatrojenik beyin hasarını en aza indirir.
