Drosophila'da Kapalı Kafa Travmatik Beyin Hasarı Uygulamak İçin Bir Yöntem

Bu makalede

Özet

Kaynak: Katzenberger, R. J., et al., Drosophila'da Kapalı Kafa Travmatik Beyin Hasarı Uygulamak İçin Bir Yöntem. J. Vis. Uzm. (2015).

Video, Drosophila'da kapalı kafa travmatik beyin hasarını (TBI) indüklemek için Yüksek Etkili Travma (HIT) cihazının kullanımını göstermektedir. TBH, nöronal fonksiyonu etkileyen mekanik beyin travmasına neden olur ve bu da zamanla nörodejenerasyon ve mortaliteye yol açar.

Protokol

1. HIT cihazının yapımı

İki cl kullanarak yayı karta takınamp ve dört vida (Şekil 1A). Kelepçeleri tahtanın genişliğine göre ortalayın ve dış kelepçe tahtanın kenarı ile aynı hizada olacak şekilde birbirine doğru itin. Kelepçeleri takmadan önce, yayın üzerine sıkıca oturması için pense kullanarak bükün.
NOT: HIT cihazını oluşturmak için gerekli malzemelerin açıklamaları için Tablo 1'e bakın. Yayın kenetlenmiş ucu, kartın kenarından 1/8 inç (3.2 mm) uzakta olmalı ve serbest uç, tahta üzerinde 3/4 inç (19 mm) uzanmalıdır. Yayı, tahtanın uzunluğuna paralel olacak şekilde ayarlayın.
Yayın serbest ucunu cırt cırtlı ilmeklerin yapışkan şeridi ile bir kez sarın. Cırt cırtın dış kenarı, yayın ucu ile aynı hizada olmalıdır. Velcro önemlidir, çünkü sıkı bir sıkıştırma bağlantısı oluşturarak şişeyi yaya sabitlemek için kullanılır. Velcro ayrıca şişelerin kolay bağlanmasına ve çıkarılmasına izin vererek birçok şişenin kısa sürede işlenmesine olanak tanır.
Buz kovası kapağını baş aşağı, ortalanacak ve ahşap tahtaya sıkıca yerleştirin. Buz kovası kapağının yükseltilmiş bölgesini, uzun kenarı tahtanın genişliğine paralel olacak şekilde yönlendirin. Buz kovasının yükseltilmiş bölgesinin ahşap tahtadan 1/2 inç (13 mm) daha yüksek olduğuna dikkat edin, böylece yaya bir şişe takıldığında yay tahta üzerinde düz durmayacaktır.
Tüm cihazı duvar gibi sabit bir nesneye doğru kaydırın, böylece buz kovası kapağı tahta ile nesne arasına sıkışır ve hareket etmez.
Kağıt iletki bir karton sinek şişesi tepsisinin altına bantlayın ve mükemmel bir dikey konuma geri çekildiğinde 90° işareti yay ile hizalanacak şekilde tahtanın uzunluğuna karşı kenarda tutun.

2. HIT cihazının çalışması

1 ile 60 CO₂-anestezili sinekleri boş bir şişeye yerleştirin ve sıkı oturan bir pamuk top kullanarak şişeyi durdurun.
Pamuk topunu alttan 1 inç (2.5 cm) olana kadar şişenin içine iterek sinekleri şişenin 1 inç (2.5 cm) altına kadar sınırlayın. Flakon üzerine 1 inç (2,5 cm) işaretinde bir çizgi çizmek faydalı olacaktır. Sinekleri şişenin daha büyük veya daha küçük bölgelerine hapsetmenin fenotiplerin şiddetini etkileyebileceğini unutmayın.
Sineklerin CO₂'den hareket kabiliyetini geri kazanması için 5 dakika bekleyin. CO₂'nin etkilerini tamamen ortadan kaldırmak için 5 dakikanın yeterli olup olmadığının bilinmediğini unutmayın.
Yayın ucunu, cırt cırtın iç kenarı şişenin üst kısmı ile aynı hizaya gelene kadar şişeye yerleştirin (Şekil 1B). Yay düz dururken, şişenin 1 inç (2,5 cm) kısmı buz kovası kapağının yükseltilmiş bölgesiyle örtüşmelidir. Şişeler birçok kez tekrar kullanılabilir.
Otururken, sol elinizin baş parmağını ve işaret parmağını kullanarak şişeyi Velcro bölgesinde tutun. Sağ elinizi kullanarak tahtayı tezgah üstüne sıkıca tutun. Alternatif olarak, tahtayı tezgah üstüne sıkıca tutmak için C-kelepçeleri kullanın.
Yayı mükemmel bir şekilde düz bir şekilde istenen açıya geri çekin. Yayı serbest bırakın. Yayın tamamen durmasına izin verin.
Şişeyi bahardan çıkarın ve sineklerin ≥5 dakika iyileşmesine izin verin. Sinekleri başka bir greve maruz bırakın veya sinekleri sinek yemi içeren bir şişeye aktarın.
NOT: HIT cihazından gelen darbelerin fenotipik etkilerini değerlendirmek için çeşitli testler kullanılabilir. Örneğin, uzun ömür üzerindeki etkiler, yaralanmadan sonra zaman zaman hayatta kalan sineklerin yüzdesi analiz edilerek belirlenebilir, beyin morfolojisi üzerindeki etkiler başın histolojik analizi ile belirlenebilir ve gen ekspresyonu üzerindeki etkiler, mRNA seviyelerinin kantitatif analizi ile belirlenebilir.
Grevlere maruz kalmayan kontrol sineklerini aynı şekilde tedavi ederek prosedürün grevlere bağlı olmayan etkilerini belirleyin. Şişenin buz kovası kapağına çarpması yüksek bir ses çıkardığı için işitme koruması kullanın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

figure-results-1
Şekil 1: HIT cihazının şeması. (A) Üstten çizimin çizimi view HIT cihazının dinlenme konumunda. (B) HIT cihazının yandan görünümünün çizimi. Yay dinlenme konumunda (koyu kırmızı) gösterilir ve 90°'ye (açık kırmızı) saptırılır.