Transendotelyal Elektrik Direncinin İn Vitro Kan-Beyin Bariyeri Modelinde Değerlendirilmesi

Özet

Kaynak: Kuzmanov, I., et al. Empedans Spektroskopisi Kullanılarak Kan-Beyin Bariyerinin İn Vitro Modeli: T Hücresi-Endotel Hücre Etkileşimine Odaklanma. J. Vis. Uzm. (2016)

Bu video, in vitro olarak fare beyni mikrovasküler endotel hücrelerinde transendotelyal elektrik direncini (TEER) değerlendirmek için bir yöntemi göstermektedir. Yüksek bir TEER değeri, sağlam endotel hücre bağlantılarını gösterirken, aktive edilmiş T hücrelerinin eklenmesi, bağlantı bariyerinin bozulmasını yansıtan TEER değerini düşürür.

Protokol

1. Transendotelyal Elektrik Direnci (TEER) Ölçümünün Ayarlanması ve Gerçekleştirilmesi

1. Transendotelyal elektrik direnci (TEER) cihazının 24 oyuklu modülünü laminer akış başlığının altına yerleştirin. Kapakları çıkarın ve forseps kullanarak cihaza birincil fare beyni mikrovasküler endotel hücreleri (MBMEC'ler) içeren ekleri yerleştirin.
2. Modül yuvalarının alt bölmesine 810 μl taze ortam pipetleyin: ek parça ile modül kuyusunun duvarı arasına dikkatlice yerleştirin.
3. Kapakları kapatın ve aleti inkübatöre yerleştirin. Enstrümanı bilgisayarına bağlayın; Enstrüman kontrol cihazını açın ve yazılımı açın.
4. Açılır pen....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
cellZscope	nanoAnalytics GmbH	www.nanoanalytics.com	dahil: 24 kuyulu Hücre Modülü, Denetleyici, cellZscope yazılımı v2.2.2
Transwell membran ekleri - gözenek boyutu 0,4 μm	Corning	3470
Transwell membran ekleri - gözenek boyutu 3 μm	Corning	3472	T hücresi transmigrasyon testinden önce kalite kontrol olarak TEER ölçümü için
24 oyuklu hücre kültürü plakası	Greiner	650 180	düz tabanlı; MBMEC kültürü için
96 oyuklu hücre kültürü plakası	Yardımcı yıldız	3526	yuvarlak-alt; İmmün hücre kültürü için
Neubauer sayım odası	Marienfeld	MF-0640010	hücre sayımı için
İnsan plasentasından kollajen tip IV	Sigma	C5533
Sığır plazmasından elde edilen fibronektin	Sigma	F1141-5MG
DMEM (+ GlutaMAX)	Gibco	31966-021
Penisilin/Streptomisin	Sigma	P4333
Heparin	Sigma	H3393
İnsan Temel Fibroblast Büyüme Faktörü (bFGF)	PeproTech	100-18B
IMDM + %1 L-Glutamin	Gibco	21980-032	T hücre kültürü ortamı için
Rekombinant Murin IFN-γ	PeproTech	315-05	T hücresi transmigrasyon testleri için
Rekombinant Murin TNF-α	PeproTech	315-01A	T hücresi transmigrasyon testleri için
NA/LE saflaştırılmış anti-fare IFN-γ antikoru	BD Biyolojik Bilimler	554408	klonla; Önerilen nihai konsantrasyon: 20 μg/ml
Granzim B İnhibitörü II	Calbiochem	368055	önerilen nihai konsantrasyon: 10 μM
PE anti-fare CD4 antikoru	Biyoefsane	116005	RM4-4 klonu; T hücresi transmigrasyonunun analizi için
Tripan Mavisi çözeltisi, %0,4	Thermo Fisher Bilimsel	15250061	hücre sayımı için

ile PC Ana okuma olarak TEER ölçümü için MBMEC kaplama çözümü için MBMEC kaplama çözümü için MBMEC izolasyonu ve MBMEC kültür ortamı için MBMEC izolasyonu ve MBMEC kültür ortamı için MBMEC kültür ortamı için MBMEC kültür ortamı için XMG1.2'yi