Hemiparkinson Sıçanında Motor Fonksiyon Değerlendirmesi için Merdiven Testi

Özet

Kaynak: Rattka, M, et al., Hemiparkinson Sıçanında Derin Beyin Stimülasyon Etkilerinin Motor Sonucunu Değerlendirmek İçin Yeni Bir Yaklaşım: Merdiven ve Silindir Testi. J. Vis. Exp. (2016).

Bu video, sağ beyin lezyonu olan bir hemiparkinson sıçanında motor fonksiyonu değerlendirmek için merdiven testini göstermektedir. Lezyon dopamin sinyalini bozar, sol pençe kontrolünü bozar, bu da sol merdivenlerde daha fazla pelet kalmasına neden olur ve bu da motor disfonksiyonu gösterir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Merdiven Testi (Şekil 1)

1. Edinme Aşaması
   1. Eğitimden bir gün önce hayvanları Merdiven testinde kullanılan peletlerle tanıştırın.
      1. İsteğe bağlı: Hayvanın motivasyonunu artırmak için bir diyet kısıtlaması kullanın (vücut ağırlığını serbest besleme seviyesinin% 90'ında tutmak için 10-15 g standart laboratuvar yemeği). Ancak, olumlu bir eğitim etkisi elde etmek için bu zorunlu değildir. Bu çalışma gıda kısıtlaması olmaksızın yapılmıştır.
   2. Kutuyu %0,1 asetik asit solüsyonu ile temizleyerek şeffaf plastik bir cam merdiven kutusu (yükseklik: 34,5 cm, uzunluk: 35,5 cm, genişlik: 12 cm ve dar bölme 6 cm) hazırlayın. NOT: Merdiven kutusu, yükseltilmiş bir platforma ve dar bölmede iki merdivene sahip iki bölmeli bir kutudur. Dar bölmede yer alan merdivenlerde sol basamaklara sadece sol pençe ile, sağ basamaklara ise sadece sağ pençe ile ulaşılabilmektedir.
      NOT: Standart merdiven kasaları, kapaklı iki bölmeden oluşur. Kablo ile uyarılan farelerle yapılan deneyler için kullanılacaklarsa, kapaksız yüksek bir kutu kullanın.
   3. Merdiveni çıkarın ve her basamaktaki kuyuları sekiz adet 45 mg pelet ile doldurun.
   4. Merdiveni yerleştirin ve yükseltilmiş platforma sekiz ek pelet koyun.
   5. Fareyi taşıma kutusuna yerleştirin.
   6. Taşıma kutusunu kullanarak fareyi ev kafesinden merdiven kutusuna taşıyın.
   7. Fareyi merdiven kutusuna yerleştirin (Şekil 2).
   8. Beş dakika sonra, hayvanı merdiven kutusundan çıkarın ve taşıma kutusunu kullanarak ev kafesine geri koyun.
   9. Platformdan ve (sonunda) sağ ve sol merdivenlerden kaç tane pelet yenildiğine dikkat edin.
   10. Her basamaktaki kuyuları sekiz adet 45 mg pelet ile doldurarak merdiveni yeniden doldurun.
   11. Merdiven kutusunu %0,1 asetik asit solüsyonu ile temizleyin ve ek peletleri platforma yerleştirin.
   12. Bu prosedürü (edinme aşaması) arka arkaya üç gün tekrarlayın.
       NOT: Açıklanan tüm deneyler erkek Sprague Dawley sıçanları üzerinde gerçekleştirilmiştir. Farklı eğitim modüllerinin süresi, farklı suşlar, cinsiyetler ve satıcılardaki sıçanlarda farklılık gösterebilir.
2. Serbest Seçim Testi
   1. Merdiven kutusunu %0,1 asetik asit solüsyonu ile temizleyin.
   2. Merdiveni çıkarın ve her basamaktaki kuyuları sekiz adet 45 mg pelet ile doldurun.
   3. Fareyi taşıma kutusuna yerleştirin.
   4. Taşıma kutusunu kullanarak fareyi ev kafesinden merdiven kutusuna taşıyın.
   5. Fareyi merdiven kutusuna yerleştirin.
   6. Beş dakika sonra, hayvanı merdiven kutusundan çıkarın ve taşıma kutusunu kullanarak ev kafesine geri koyun.
      Sağ ve sol merdivenlerden kaç tane pelet yenildiğine dikkat edin.
   7. NOT: Hayvanlar hala peletleri kavrama konusunda sorun yaşıyorsa, kolayca ulaşılabilecekleri platforma biraz daha ekleyin.
   8. Her basamaktaki kuyuları sekiz adet 45 mg pelet ile doldurarak merdiveni yeniden doldurun.
   9. Merdiven kutusunu bir sonraki hayvan için% 0.1 asetik asit çözeltisi ile temizleyin.
   10. Bu prosedürü (serbest seçim aşaması) arka arkaya üç gün tekrarlayın.
       NOT: Sunulan sonuçlar, modüller arasında dinlenme süresi olmadan gerçekleştirilen eğitimlerle elde edilmiştir. Bazı gruplar, eğitim sürecini desteklemek için konsolidasyon için dinlenme gününü tercih eder.
3. Zorunlu Seçim Testi
   1. Merdiven kutusunu %0,1 asetik asit solüsyonu ile temizleyin.
   2. Merdiveni çıkarın ve sol merdivendeki her basamaktaki kuyuları sekiz (modülün ilk üç günü) veya dört (modülün ardışık üç günü) 45 mg topakla doldurun.
      1. Bozulmanın meydana geleceği tarafta zorunlu seçim testini gerçekleştirin.
         NOT: Parkinson lezyonunu sağ hemisferde gerçekleştiriyoruz ve bu nedenle sol pençeyi seçici olarak eğitiyoruz.
   3. Fareyi taşıma kutusuna yerleştirin.
   4. Taşıma kutusunu kullanarak fareyi ev kafesinden merdiven kutusuna taşıyın.
   5. Fareyi merdiven kutusuna yerleştirin.
   6. Beş dakika sonra, hayvanı merdiven kutusundan çıkarın ve taşıma kutusunu kullanarak ev kafesine geri koyun.
   7. Sol merdivenden kaç tane pelet yenildiğine dikkat edin.
   8. Her basamaktaki kuyuları sekiz veya dört adet 45 mg pelet ile doldurarak merdiveni yeniden doldurun (pelet sayısı eğitim gününe bağlıdır).
   9. Merdiven kutusunu bir sonraki hayvan için% 0.1 asetik asit çözeltisi ile temizleyin.
   10. Bu prosedürü (zorunlu seçim aşaması) arka arkaya altı gün tekrarlayın.
4. Veri Toplama
   1. Deneyi, zorunlu seçim modülü (sol merdivendeki her bir kuyucukta dört topak) için açıklandığı gibi art arda iki gün boyunca gerçekleştirin. Başarı oranını (yenen pelet sayısı) iki günün ortalaması olarak hesaplayın.

Sonuçlar

Şekil 1: Merdiven test düzeneği. Merdiven kutusu, sol merdivende peletlerle düzenlenmiştir. (A) yandan görünüm, (B) yukarıdan görünüm.

Şekil 2: Merdiven testi. Merdiven testi sırasında bir hemiparkinson sıçanı.

(NOT: resim...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Kapaksız merdiven kutusu	Glas Keil, Almanya		özel yapım
Tozsuz hassas peletler, 45 mg	Biyo Serv	F0021