Sıçan Beyin Bölümlerinde RNA Ekspresyonunu İncelemek için Oligonükleotid Probları Kullanılarak Yerinde Hibridizasyon

Özet

Kaynak: Shokry, I. M., et al. Serotonin Sendromlu Sıçanların Paraformaldehit Önekli Beyninde Oligonükleotid Probları Kullanılarak Hızlı In Situ Hibridizasyon. J. Vis. Uzm. (2015).

Bu video, serotonin sendromundan etkilenen sıçan beyin dokusunda oligonükleotid probları kullanılarak serotonin reseptörü RNA sentezinin tespitini göstermektedir. Protokol, mikroskop altında serotonin reseptörü RNA ekspresyonunu görselleştirmek ve ölçmek için doku ön işlemi, prob hibridizasyonu, enzimatik tespiti içerir.

Protokol

Hayvan örneklerini içeren tüm prosedürler, uygun hayvan etik inceleme komitesi tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır.

1. Hazırlık

1. Doku hazırlama ve kesit alma
   1. Sıçanları rastgele üç gruba ayırın: taze/tuzlu su (SAL;% 0.9 NaCl), önceden eklenmiş/SAL ve önek/3,4-metilendioksimetamfetamin (MDMA; tablo 1'deki ayrıntılara bakın).
   2. SAL ve MDMA gruplarına 2 saat aralıklarla intraperitoneal olarak sırasıyla 1 ml / kg SAL ve 10 mg / kg MDMA olmak üzere üç doz uygulayın. Hayvanların tedaviden 6 gün boyunca kurtulmasına izin verin.
   3. 7. günde, derin bir anestezi iç....

Sonuçlar

Tablo 1. Deney tasarımı

	Taze	Paraformaldehit önekia
	SALb	SALb	MDMAc
Hedef araştırma (htr2a)	√	√	√
Pozitif yoklama (ppiB)	–

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
RNAscope Negatif Kontrol Probu-DapB	Gelişmiş hücre teşhisi, INC	310098
RNAscope Ön İşlem 4	Gelişmiş hücre teşhisi, INC	320046
RNAscope 2.0 HD Reaktif Kiti - Kırmızı	Gelişmiş hücre teşhisi, INC	310036
RNAscope Probu - Rn-ppib	İleri hücre teşhisi, INC	313921
Sıçan Htr2a	Gelişmiş hücre teşhisi, INC	300031
Kriyostat	Leica	CM 1850
Yatay çalkalayıcı	VWR	88032-088
Hibridizasyon fırını	Thermo Fisher Bilimsel	222000
Superfrost Plus mikroskop slaytı	Fisher Bilimsel	12-550-15
Hidrofobik kalem	Vektör	H-4000
Mikroskop	Olimpos	Provis AX70