Sıçanlarda İşitsel Korteks Çıkarılması için Stereotaktik Kılavuzlu Bir Ablasyon Tekniği

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Farenin Hazırlanması

NOT: Herhangi bir hormonal değişikliği önlemek için deneyleri erkek sıçanlarda gerçekleştirdik.

1. Kas içine enjekte edilen ketamin hidroklorür (30 mg / kg) ve ksilazin hidroklorür (5 mg / kg) karışımı kullanarak hayvanı uyuşturun; Bu dozla, sıçan yaklaşık 1 saat boyunca derinlemesine anestezi altına alınmalıdır.
2. Sıçanın ayak parmağını sıkıştırın; geri çekilme refleksinin olmaması, hayvanın tamamen bilinçsiz olduğunu gösterir. Sıçan tutamına cevap verirse, başlangıç dozunun üçte birinde ek anestezi verin.
3. Saç derisini tıraş edin ve cerrahi bölgeyi povidon-iyot ile dezenfekte edin.
4. 38 °C'lik bir sıcaklığı korumak için hayvanı bir ısıtma yastığına yerleştirin ve iki kulak çubuğu ve bir ısırma çubuğu kullanarak hayvanın kafasını stereotaksik bir çerçevede sabitleyin. Kulak çubuklarıyla kulak zarını delmemek için dikkatli olun.
5. Her göze bir damla oftalmik jel veya serum salin uygulayarak gözleri koruyun.

2. AC'nin farenin temporal kemiğindeki yeri

1. Bir neşter kullanarak, kafatasını ortaya çıkarmak için orta hat boyunca bir kesi yapın ve kafatasının yüzeyini kaplayan periosteuumu geri çekin.
2. Sıçan beyninin Paxinos ve Watson atlasına göre bregma, lambda ve interaural 0'ı görselleştirmek için kafatasının yüzeyini kaplayan kanı nazikçe çıkarmak için steril bir pamuk uç kullanın.
3. Temporal kasta, kafatasındaki dorsal girişinin yakınında bir neşter ile bir kesi yapın. Bir iğne ve dikiş materyali kullanarak kası dışarı çekin ve dikiş materyalini stereotaktik çerçeveye sabitleyin; Bu temporal kemiği açığa çıkaracaktır. Kanama olursa, soğuk steril tuzlu su ile durulayın.
4. Stereotaktik mikromanipülatöre steril bir düz iğne yerleştirin ve tamamen sabitlendiğinden emin olun.
5. İğneyi kafatasının yüzeyinin tam üzerine gelene kadar yavaşça indirin, böylece iğnenin ucu interaural 0'a ayarlanır. Bu noktayı sıfır olarak ayarlayın ve koordinatları bu noktadan itibaren belirleyin.
6. Beynin ilgi alanına bağlı olarak, stereotaktik koordinatları değiştirin. Sıçan beyninin Paxinos ve Watson atlasını kullanarak bu koordinatları belirleyin. Koordinatlar belirlendikten sonra, iğneyi bu koordinatlarla eşleşecek şekilde hareket ettirin.
7. Aşağıdaki dört noktanın koordinatlarını kullanarak AC'yi hedefleyin: A: ön-arka (A/P) = -5.8 mm, mediolateral (M/L) = +/- 6.4 mm; B: A/P= -2,7 mm, M/L= +/- 6,4 mm; C: A/P= -2.7 mm, M/L= +/- 8.67 mm; D: A/P= -5.8 mm, M/L= +/- 8.67 mm. Bu dört noktanın her birini görselleştirmek için iğneyi temporal kemiğin hemen üzerine indirin. Bir işaretleyici kalem kullanarak, temporal kemik üzerindeki noktaları işaretleyin ve bir dikdörtgen çizmek için birleştirin; dikdörtgen, kemikte bir pencerenin açılması için bir kılavuz görevi görecektir (Şekil 1).

3. AC'nin Cerrahi Maruziyeti

1. Elektrikli bir matkap ve küçük bir matkap ucu (0,6 mm Ø) kullanarak pencereyi açın. Dikdörtgenin çevresini kemik çıkana kadar 8.000 rpm'de delin. Subkortikal yapılara zarar vermemek için soğuk steril tuzlu su ile durulayarak delme yüzeyini soğutun. Kemik yol verdiğinde, dirençte bir düşüş tespit edilebilir. Beyni delmemeye dikkat edin.
2. Sınırlar gevşediğinde, kaplama kemiğini ince forseps ile yukarı çekin ve soğuk steril tuzlu su içinde saklayın.

4. AC'nin ablasyonu

1. Cerrahi bir mikroskop (10X) kullanarak, meninksleri mikrocerrahi bir bıçakla nazikçe kesin ve iki ince uçlu forseps kullanarak çıkarın. Kanama olursa, soğuk steril tuzlu su ile durulayın.
2. Steril 20 G künt uçlu iğneye bağlı bir cerrahi aspirasyon cihazı (basınç -0,24 bar) kullanarak AC'yi nazikçe aspire edin. Bu nokta kritiktir ve çok dikkatli bir şekilde gerçekleştirilmesi gerekir: alttaki beyaz maddeyi değil, yalnızca altı kortikal tabakayı aspire edin.
3. Perforan arterlerin kanaması durana kadar aspire edin.
4. Aspirasyon bittiğinde, yaralı bölgeyi çıkarılan kemikle örtün ve emilebilir bir hemostatik gazlı bez uygulayın.
5. Temporal kasın orijinal pozisyonunu geri kazanmasına izin verin ve ardından yara klipsleri (9 mm) kullanarak cildi dikin. Antibiyotik merhem sürün. Üç gün boyunca yaraya günde iki kez merhem sürmeye devam edin.
   NOT: Her uygulama yara üzerine uygulanan ince bir tabakadan oluşur.
6. Ameliyattan 1 saat sonra analjezik olarak sıçanın arkasına (0.05 mg / kg) deri altına buprenorfin enjekte edin ve daha sonra 72 saat boyunca her 8 saatte bir
enjekte edin.
7. Hayvanı uyanana kadar ısıtma yastığı üzerinde tutun ve iyileşmesi için barınma kafesine geri koyun.

Şekil 1: Sıçan temporal kemiğinin üç farklı cerrahi adımdaki görüntüleri. (A) AC'nin stereotaksik koordinatlarının temporal kemiğe aktarılması. Dört noktanın koordinatları şöyledir: A: A/P= -5.8 mm, M/L= +/- 6.4 mm; B: A/P= -2,7 mm, M/L= +/- 6,4 mm; C: A/P= -2.7 mm, M/L= +/- 8.67 mm; D: A/P= -5.8 mm, M/L= +/- 8.67 mm. (B) Koordinatlar, bir pencerenin açılmasına rehberlik edecek temporal kemiğin yüzeyine bir dikdörtgen çizmek için referans olarak kullanılır. (C) Delme işleminden sonra kemikte açılan pencereyi gösterir. Kan damarları ile meninksler beynin yüzeyinde gözlenebilir. R: rostral, D: sırt.